沙棘对小鼠免疫功能作用探究.docVIP

沙棘对小鼠免疫功能作用探究（1.滨州医学院，山东 滨洲256603；2.烟台市警备区第二干休所，山东 烟台 264000）?? 摘 要：目的：观察沙棘对小鼠抗体形成细胞的作用。方法：取小鼠24只，随机分为对照组和实验组，分别用生理盐水和100%浓度沙棘浸出液定期给小鼠灌胃，然后进行小鼠抗体产生能力检测、特异玫瑰花环结形成细胞检测（SRFC）、血清IgG检测。结果：实验组以上三项免疫学指标均有显著增高，与对照组相比均有非常显著性差异。结论：沙棘有明显促进小鼠免疫功能增强的作用。? 关键词：沙棘；小鼠免疫功能；研究? 中图分类号：R284文献标识码：A文章编号：1673-2197（2009）01-0038-02?? 沙棘（Hippophae rhamnoides L）又名醋柳、酸刺子为胡颓子科多年生灌木或小乔木沙棘的成熟果实和叶。秋、冬二季果实成熟或冻硬时采收，除去杂质，干燥或蒸后干燥。主产于陕西、四川、甘肃、宁夏、山西、辽宁等省。主要功效：益气生津，祛痰止咳，消食止泻，活血散瘀[1]。其化学成分主要有黄酮类、萜类、甾体类、蛋白质和氨基酸类、油和脂肪酸类、挥发油类、有机酸类、糖及微量元素等，是一种营养丰富、药用价值极高的植物[5]。近年来引起国内外学者的极大重视。我们主要进行了沙棘对抗体形成细胞作用的研究，旨在为沙棘的临床应用提供科学依据。? 1 材料与方法? 1.1仪器与药物? 低温冷冻离心机（Beckmen，美国）；美国Multiskan产全自动酶标仪；恒温水浴箱（上海）；电泳仪（上海）；100目不锈钢网。沙棘（购于附属医院中药房），取100g加水1000mL，文火煎煮2h，去渣浓缩为100mL（浓度为100%）备用。? 1.2 实验动物及分组? 取BALB/C纯系小鼠24只，体重18~22g，雌雄各半，随机分为两组，每组12只，Ⅰ组为生理盐水对照组，Ⅱ组为药物实验组。? 1.3 方法? Ⅰ组用生理盐水灌胃，1次/d，0.5mL/（次#8226;只），共灌胃10次；Ⅱ组用沙棘液灌胃，1次/d，0.5mL/（次#8226;只），共灌胃10次。? 1.4 检测项目? （1）定量溶血分光光度测定法（QHS）[2] 。本法体外测定B细胞产生分泌抗体裂解红细胞所释放的血红蛋白量（以OD值表示），其结果可反映机体体液免疫功能。实验第5天分别将5%的绵羊红细胞0.2mL注入各组小鼠腹腔内。第11天颈椎脱臼处死小鼠，常规取脾脏，制备脾细胞悬液，然后脾细胞计数，调整细胞浓度至1×10?7/mL，将脾细胞悬液均分，每组每只小鼠设3支试管，每管依次加入脾细胞悬液，0.2%绵羊红细胞（SRBC），1∶10新鲜豚鼠血清（补体）各1mL混匀。另外分别设补体、脾细胞以及SRBC对照管各3支，置37℃水浴1h，2000转/min离心5min。取上清液用96孔细胞培养板于全自动酶标仪450nm波长处测A值，作为QHS反应值。? （2）特异玫瑰花环形成细胞检测（SRFC）[3] 。取脾细胞0.1mL（1×10?7/mL），1%SRFC 0.1mL，小牛血清0.1mL，试管内混匀，4℃放置2h，加结晶紫溶液20μL，计数500个淋巴细胞，求出SRFC/106脾细胞的形成率。? （3）血清IgG检测[3]。采用对流免疫电泳实验，摘除小鼠眼球取血，分离血清，取不同稀释度血清10μL加入阴极端琼脂板孔中，将琼脂板阳极端孔内加入羊抗鼠IgG（1∶32）10μL，将对流免疫电泳通电30min后观察结果，以血清最高稀释度仍有明显沉淀线为准。结果以稀释度表示。? 2 结果? （1）沙棘对抗体形成细胞的影响。? 表1结果显示，用药组可促进抗体细胞形成，与对照组相比有显著性差异（P 0.05）。? （2）沙棘对SRFC的影响。? 表2结果显示，用药组SRFC产生明显增强，与对照组相比有非常显著性差异（P 0.01）。? （3）沙棘对小鼠IgG的影响。? 表3结果显示，用药组可明显促进IgG产生。与对照组相比有显著性差异（P0.01）。? 3 讨论? 沙棘是临床上常用的中药，用于咳嗽痰多、消化不良、食积腹痛、跌打瘀肿等[4，5]。现代研究表明：沙棘能显著增加小鼠血清溶菌酶的含量，极显著地提高绵羊红细胞的滴度，也能提高巨噬细胞的吞噬功能，提高淋巴细胞转化率和自然玫瑰花环形成率，且能明显增加血清IgG的含量；并有抗心肌缺氧的作用、保肝的作用和抗炎抗放射的作用[6，7]。本研究重点从细胞及分子水平探讨沙棘对抗体形成细胞、IgG分子的影响。实验证明，沙棘能增强小鼠抗体形成细胞（B细胞）活性，促进B细胞分化、增殖为浆细胞；沙棘组的QHS值增高与对