糖化血红蛋白检测方法及临床应用.docVIP

糖化血红蛋白检测方法及临床应用文章编号：1009-5519（2007）15-2286-02 中图分类号：R446 文献标识码：A 糖化血红蛋白（glycosylated hemoglubin,GHb）是糖尿病诊断和治疗的重要指标，广泛应用于临床。近年来，GHb检测方法发展迅速，早期检测以电泳法、微柱层析法应用较广泛，目前免疫比浊法和化学发光法（IVIA法）检测已开始在临床应用。现就GHb的检测及临床应用综述如下。 1 GHb的生物化学特征 成人细胞中的血红蛋白（Hb）主要是HbA1，占90%以上，HbA2占2.5%，HbF占0.2%其余为HbA3，凡连接有已糖的HbA1统称为GHb。其中HbA1又可分为HbA1a，HbA1b和HbA1c。HbA1c最多，占GHb总量的80%。HbA1c的β链N―末端缬氨基酸氨基与葡萄糖醛基通过非酶促反应而连接；HbA1a1的N―末端可连接1，6―二磷酸果糖；HbA1a2可与葡萄糖―6―磷酸连接。这种Hb与糖结合的形成过程称为糖基化作用，GHb是HbA合成化学修饰的结果。GHb是在红细胞生存期间，HbA1与血中已糖（主要为葡萄糖）缓慢、连续的非酶促反应产物，为HbA1合成后化学修饰的结果。GHb的形成取决于血糖浓度和作用时间，生成量与血中葡萄糖浓度成正比。 2 GHb的检测方法 2．1 酶法：GHb大多采用HLPC和免疫法测定。HPLC法能测异常Hb，重复性良好，但需要专用仪器且实验需要时间较长。免疫法采用自动化分析仪，但需要分别测定总HbT GHb。酶法能克服以上缺陷。酶法的原理是利用果糖氨基氧化酶（Fructosyl amino acid oxidase，FAOD）将GHb分解，产生果糖氨基酸和H2O2，经过氧化物酶（POD）催化H2O2与DA―64反应产生绿色，在751 mm波长测定吸光度求得GHb浓度。 本法特点为FAOD只使GHb产生果糖基氨基酸，用FDP活化代替触酶可以清除干扰，GHb中干扰物质可用WST―3与GHb结合而去除。此法精度良好，可同时测GHb和Hb,不需专门仪器，简便快捷，结果精确。 2.2 免疫抑制浊法：GHb检测基于免疫抑制比浊法[1]，应用一种抗血红蛋白β链糖化氨基末端特异性抗体与标本中的GHb作用形成一种抗原―抗原复合物，再通过加入多聚半抗原与剩余的抗血红蛋白抗体结合形成一种较稳定的多聚半抗原―抗体复合物[2]，形成浊度。反应液浊度的变化与标本中GHb的浓度成反比。另采用氰化高铁法测定标本中Hb总量，并计算GHb占Hb的百分比。 采用免疫抑制比浊法测定GHb，结果准确可靠，灵敏度高，稳定性强，不易受干扰物质影响，且方法简单快捷，适合全自动化仪分析，易于临床推广应用，可作为测定GHb的首选方法。 2.3 化学发光法（ICIA）：ICIA采用离子捕捉免疫分析法[4]，应用抗原抗体反应原理，并联以荧光标记物，通过连接带负电的多阴离子复合物，吸附到带正电的的纤维表面，经过一系列彻底清洗等步骤后，测定荧光强度变化率，计算GHb浓度。ICIA法采用专用试剂包和免疫发光分析仪，其检测系统易于规范和重复，可减少操作技术误差，检测的灵敏度和特异性高，批内、批间变异系数小，回收率达98.85%，准确度高，交叉污染率小于0.01%，影响因素少。免疫比浊法重复性较好，但易受脂血、黄疸等样本因素影响，抗交叉污染较差，而且要求Hb在70～230 g/L之间。微柱层析法由于手工操作步骤繁琐，层析时间和微柱的质量不易控制，易产生操作技术误差，重复性欠佳，因此有条件的实验室就使用化学发光法检测GHb,提供更准确的实验数据，辅佐临床的诊断和治疗。 2.4 乳胶凝集法[4]：本法是利用抗原抗体反应原理直接测定GHb的百分含量的方法。样品中总Hb和GHb与乳胶有相同的特异性鼠单克隆抗体的复合物，此复合物由于单抗鼠IgG抗体而形成凝集，凝集量随乳表面固相化的GHb量的不同而异。通过测定透射吸光度的变化来表示凝集量，与GHb百分浓度的标准曲线比较后，求出样品中GHb的百分含量。 本方法把乳胶增强免疫比浊法和自动化仪很好的结合在一起，具有免疫比浊法特异性强、重复性好、检测灵敏度高、线性范围宽等优点，以及能进行全自动大批量测定的优点。测定GHb的参考范围为3.8%～5.8%，与文献报告的4.7%～6.3%和3.8%～6.2%接近。该法测定GHb受高浓度葡萄糖、高甘油三酯、高胆红素等物质的干扰，红细胞压积的变化，在绝大部分各种临床情况下对测定结果没有显著的影响。该法鉴于具有快速、准确、精密度高等优点，可以使用自动化分析仪的单位推广使用[5]。 2.5 离子交换高效液相色谱分析法：用弱酸性阳离子交换树酯，在选定低浓度洗脱液的离子强度及pH