耳穴埋针对血管性痴呆大鼠记忆障碍及β淀粉样蛋白表达影响.docVIP

耳穴埋针对血管性痴呆大鼠记忆障碍及β淀粉样蛋白表达影响[摘要]目的：探讨耳穴改善血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆障碍的反应机制。方法：采用4－血管阻断(4－Vesselocclusion，4－VO)全脑缺血再灌注制备VD大鼠模型，随机分为假手术组、正常对照组、模型组、耳针组，针刺耳穴脑、肾后，做免疫组化、行为学检测、图像分析。结果：耳针能显著降低VD模型大鼠脑内顶叶皮层Aβ免疫阳性神经元的细胞数，升高其平均光密度值(P0．05)，表明耳针治疗后大鼠空间分辨学习记忆能力得到明显的改善。见表1。 2．2 HE染色结果 HE染色见模型组大鼠大脑顶叶皮层区存在神经细胞排列稀疏，细胞周围组织水肿；细胞变性、坏死，出现噬细胞现象；细胞结构变得不完整，有梗死病灶(见图1a～图1c)。 2．3免疫组织化学染色结果 与对照组相比，模型组Aβ阳性神经元细胞数显著升高，平均光密度值降低，差异具有显著性意义(P 结果显示，Aβ免疫阳性神经元主要分布于大脑顶叶皮层、海马等部位，神经元呈锥形、不规则形等，阳性反应物呈棕黄色，定位于细胞膜，细胞核呈阴性。另外，在脑血管壁上也可见Aβ的沉积。对照组大鼠大脑顶叶皮层和海马区有极少量Aβ神经元表达；VD模型组大鼠大脑顶叶皮层Aβ免疫阳性神经元广泛表达于神经细胞胞浆，染色较深；耳针治疗组Aβ阳性神经元细胞数明显降低(见图2～图5)。 3讨论 Aβ是一类由39～43个氨基酸基构成的小分子多肽，来源于脑内的p淀粉样前体产物(APP)，APP过度表达时可促进其异常途径裂解产生大量Ap沉积于脑β具有神经元毒性作用，引起神经元的退变、凋亡，在体外培养还可引起神经元死亡。Aβ对神经元毒性作用主要来自体外试验，不少学者认为Aβ神经毒性作用是聚集依赖的方式或聚集相关毒性，即可溶性Aβ聚集成不溶性Aβ纤丝才具有更强毒性。目前多数学者认为，Aβ是VD各种病理及临床改变的始发因素。Aβ在细胞外的积聚可促进神经细胞骨架的改变，导致损伤。近来的研究发现，Aβ除对细胞具有直接毒性作用外，还可增强或放大各种伤害性刺激如低糖、兴奋性毒性、自由基等细胞损伤效应。邢昂等研究发现，大鼠短暂性不全性脑缺血再灌注损伤后，海马CA1区神经细胞发生迟发性死亡，同时Aβ表达上调，提示Aβ可能在再灌注损伤后海马CA1区神经细胞迟发性死亡过程中起重要作用。Aβ可以增强血管的收缩性，Aβ升高后可通过去甲肾上腺素或其他内源性收缩活性物质导致神经元缺血而死亡。局灶性缺血时，Aβ增多，神经元发生变性坏死。有学者发现脑缺血后脑局部血流降低，Aβ含量增高，加重了神经元的损伤，可能与脑血管病发生后继发血管性痴呆有关。近期有人用铝诱导建立AD大鼠模型，观察到Aβ在大脑皮质、脑血管壁上有较多的沉积，引起了脑血流障碍、脑缺血、脑组织损伤一系列改变，表现为脑功能异常，智力下降。经过治疗后，随着Aβ表达的降低，学习记忆能力亦得到改善(受电击次数减少，潜伏期延长)。 耳针疗法是祖国医学的宝贵遗产之一，具有安全、无毒副作用、易于推广的特点。耳与五脏均有生理功能上的联系，正如《灵枢“耳者，宗脉之所聚也”。耳针可疏通经络，运行气血，扶正祛邪，调整人体的阴阳平衡，泻其有余，补其不足。现代研究证明，耳穴能抑制神经细胞凋亡、改善脑血流、提高中老年人血浆中SOD活性、降低MDA含量等作用。从中医的角度而言，血管性痴呆主要病因病机为肾精亏损，髓海不充。耳穴脑具有调节大脑皮层兴奋、抑制的双重作用，耳穴肾可益精血、补脑髓、活气血。相关研究已表明针刺耳穴脑、肾能有效改善VD大鼠的学习记忆障碍。 本实验采用4－血管阻断的方法造模，用Y－型迷宫检测大鼠的学习记忆能力，用免疫组化法检测脑内Ap表达水平的变化。实验结果显示，HE染色见到细胞受损现象，并出现梗死病灶，说明本实验造摸是成功的。各组大鼠术前Y－型迷宫学习记忆成绩无显著差异，VD模型组大鼠在术后空间分辨学习记忆能力发生严重障碍。脑缺血后的VD模型大鼠脑血管壁比正常对照组脑血管壁见到较多的Aβ沉积。VD模型组大鼠大脑皮层Aβ的阳性神经细胞表达明显高于对照组，平均光密度值低于对照组，Y－型迷宫学习记忆成绩显著下降。针刺耳穴“脑”“肾”后，Aβ的阳性神经细胞表达明显下降，平均光密度值增高，大鼠空间分辨学习记忆能力得到明显的改善，Y－型迷宫学习记忆成绩显著提高，差异具有显著性意义。提示耳针治疗后Aβ表达降低可能是耳针具有改善微循环、清除自由基、抑制神经细胞凋亡、增强免疫作用，从而恢复神经元对APP代谢的正常调节，阻止Aβ装备成有毒性的聚合体，保护神经元免受Aβ的神经毒性，避免缺血后神经元迟发性坏死，以达到改善血管性痴呆大鼠学习记忆障碍的目的。至于针刺引起Aβ阳性表达增高的机制尚不清楚，有待进一步深入研究