辛类中药挥发油对葛根素透皮吸收促进作用探究.docVIP

辛类中药挥发油对葛根素透皮吸收促进作用探究[摘要]目的：研究辛类挥发油（肉桂油、丁香油、高良姜油、茴香油、干姜油）对葛根素透皮吸收的影响。方法：采用体外透皮双室扩散池和HPLC法，测定葛根素的累积渗透量，计算渗透系数。结果：肉桂油、丁香油、高良姜油、茴香油、干姜油对葛根素均具有一定的促渗作用。结论：辛类挥发油能促进葛根素的透皮吸收。 [关键词]挥发油；促渗剂；葛根素 [中图分类号]R943 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2007）08（a）-141-02 选择理想的透皮吸收促进剂是促进药物渗透皮肤进入体内，达到有效血药浓度的重要手段。目前主要的透皮促进剂有氮酮、丙二醇、油酸等，但皆存在缺点，寻找新的透皮吸收促进剂对于经皮给药制剂的开发与研究具有重要意义[1]。近年的研究发现中药的许多成分具有透皮吸收促进作用，有些精油如冬青油、茴香油、丁香油酚等有极好的透皮吸收促进作用[2]。本文以葛根素为模型药物，研究了肉桂油、丁香油、高良姜油、茴香油、干姜油等5种辛类挥发油对药物的透皮吸收促进作用，为从中药寻找新的透皮吸收促进剂提供实验依据。 1 仪器与材料 1.1 仪器 Valia Chien双室扩散池(中国科学院上海有机化学研究所)；超级恒温器(上海市实验仪器厂)；78-1Ａ磁力搅拌器(上海南汇电讯器材厂)；高效液相色谱仪(HP1100型)。 1.2 药品与试剂 葛根素（杭州天香化学有限公司提供，批号纯度98.0％）；葛根素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：752-200108）；肉桂油、丁香油、高良姜油、茴香油、干姜油（按中国药典附录方法自提）；甲醇为色谱纯，其余为分析纯。 1.3 动物 裸鼠，♂，体重(20±2) g，由南方医科大学实验动物中心提供。 2 实验方法和结果 2.1 皮肤渗透液中葛根素的测定 2.1.1色谱条件色谱柱：C18(4 mm×250 mm，5 μm)；流动相：甲醇-水（30∶70）；流速：0.8 ml/min； 柱温：室温；检测波长：250 nm（UV-VIS分光光度计）。理论板数按葛根素峰计算应不低于2 000。 2.1.2 溶液的制备精密称取葛根素对照品适量，置量瓶中，加25%乙醇溶解，并加至刻度，摇匀，即得对照品溶液(0.5 mg/ml)。精密量取皮肤渗透液1 ml于量瓶中，用25%乙醇加至刻度，摇匀；精密量取10 ml置100 ml量瓶中，加25%乙醇至刻度，摇匀，以0.45 μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。按2.2.2方法项下，以空白生理盐水为供试药液，取12 h的皮肤渗透液为阴性对照溶液。 2.1.3 干扰性考察分别吸取供试品溶液、阴性对照溶液、对照品溶液各10 μl，注入高效液相色谱仪。结果在葛根素峰对应的保留时间处无干扰杂质峰。色谱行为见图1。 2.1.4 线性关系的考察分别精密吸取葛根素对照品溶液1、 2、3、5、8、10 ml，置50 ml量瓶中，加25%乙醇至刻度，摇匀，各进样20 μl，测定峰面积值。以葛根素的质量浓度为横坐标，峰面积值为纵坐标作图得一直线，其回归方程为Y=33.154X+8.750，r=0.999 9。结果表明葛根素在0.25~2.50 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。 2.1.5 精密度试验精密吸取供试品溶液20 μl，注入高效液相色谱仪，重复5次，测定峰面积，结果葛根素峰面积的RSD为0.87%。 2.1.6 稳定性试验精密吸取同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10 h测定峰面积，结果葛根素峰面积的RSD为0.90%。结果表明供试品溶液在10 h内基本稳定。 2.1.7 重现性试验取同一批样品5份，制备供试品溶液，进样测定，结果葛根素峰面积的RSD为0.71%。 2.1.8 加样回收试验精密吸取样品0.5 ml，共6份，分别精密加入葛根素对照品溶液适量，按供试品溶液的制备方法操作。精密吸取20 μl，进样高效液相色谱仪，依法测定，结果平均回收率为99.87%，RSD为0.41%(n=6) ，结果见表1。 2.2 透皮吸收试验 2.2.1 离体皮肤的制备 将裸鼠脱颈处死，取腹部皮肤，去掉皮下脂肪，用生理盐水洗净，浸泡，置冰箱中冷藏备用。 2.2.2 透皮试验方法 将处理好的皮肤置于Ｖ-C水平扩散池结合处，使角质层面向供给池，用弹簧夹固定。在供给池中加入供试药液，接收池中加入生理盐水，恒速电磁搅拌，扩散池夹层水浴温度保持在(37.0±0.5)℃。按预定的时间（0，2，4，6，8，10，12 h）从接收池取样1 ml，并随即补充等量的生理盐水，用HPLC测定样品浓度，以累积