编号：生物农药研究中心2007-09-24共4页承担单位：福建农科院.DOC

编号：生物农药研究中心[2007-09-24], 共页 承担单位：福建省农科院生物技术研究所 课题编号： 课题名称： 课题负责： 子课题名： 子课题号： 子课题人： 试验设计： 试验项目：土壤标本中芽孢杆菌的分离 试验人员：刘国红 肖荣凤 林营志 周先治 试验负责：刘国红 报告日期：2007-0-24 计数月份：2007年0月 研究资格系数 (0.5-1.0) 实验设计系数 （0.9-1.0） 报告得分 总分 实验设计 实验记载 实验分析 实验简报 实验文章 1-20% 21-40% 41-60% 61-80% 81-100% 1%-5% 设计不足，实施错误 6%-10% 设计不全，实验无果 11%-15% 设计可以，实施不全 16%-20% 设计完整，分布实施 21%-25% 实验不全，记载无果 26%-30% 实验不足，记载不全 31%-35% 独立实验，记载不全 36%-40% 分布实验，记载完整 41%-45% 目的明确，实验完成 46%-50% 实验完整，记载清晰 51%-55% 实验系统，结果可信 56%-60% 实验创新，分析清晰 61%-65% 实验创新，结论清晰 66%-70% 实验完整，统计清晰 71%-75% 实验系统，数据可靠 76%-80% 报告完整，文章雏形 81%-85% 结构合理，分析有据 86%-90% 逻辑清晰，统计合理 91%-95% 图表完整，写作流畅 96%-100% 文献完整，发表水平 福建省农业科学院生物技术研究所 生物农药研究中心 电话: 0591 传真: 0591 试验目的 土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现有重要应用潜力的微生物的主要菌源。不同土壤微生物的含量不同[1]，土壤是芽孢杆菌最丰富的来源[1]。芽孢杆菌多样性的研究在科学领域研究的和很少，采用现代分类手段对其中芽孢杆菌资源进行调查和分类研究可望获得芽孢杆菌的一些生产年应用或者潜在应用价值的菌株，具有重要的科学意义和经济价值，对建立相应的芽孢杆菌资源库和数据库有重要意义。所以芽孢杆菌的研究蕴涵着巨大的经济效益和科学价值，而开发和应用这种效益与价值的前提就是资源的获得和资源的探入研究，因此芽孢杆菌的资源分类是有着重要意义的科研项目。 本实验主要是采用稀释平板法[1,2,3]从土壤中分离芽孢杆菌，将类似芽孢杆菌的菌落挑出进行培养，纯化培养得到的菌落斜面保存,作为下一步实验的菌种材料。 2．试验方法 2.1材料与仪器 土样 1 2007.9.13 武夷山御茶园九坪2龄 大红袍茶园 200m 3.97 2 2007.9.14 建阳莒口33年菜茶种 180m 4.73 3 2007.9.12 14年生福建水仙茶园 武夷山武夷镇黄柏村黄龙山 200m 4.44 4 2007.9.13 30年肉桂茶园 武夷山天心村大坑口茶园 150m 4.56 仪器振荡器、摇床。 试验方法 称样：称取10 g土壤至装有90 mL无菌水的三角瓶，摇床振荡15 min， 使之充分溶解，即配成10-1浓度； 稀释土壤原液：吸取1 mL原液至装有9 mL无菌水的试管，即配成10-2浓度，依次稀释配置成10-3、10-4； 水浴：将稀释好的土样溶液放在80℃水浴锅水浴10 min，期间振荡2-3次； 平板涂布：超净台上无菌操作，溶液在振荡器上振荡10-20 s，吸取200 μL至相应标记浓度的平板上，溶液滴至平板中央，用涂布棒涂匀。涂好的平板正放静置一会，使溶液渗透进平板中。每个梯度重复3次； 培养:：将涂好的平板用报纸包好倒置于30℃恒温箱中培养2 d； 划线分离：观察分离培养的菌落，将要纯化的菌落标上标记，无菌操作用接种环直接取平板上要分离纯化的菌落至相应标记的平板上，划线完后放在30℃温箱中培养.； 结果计算：每克土样中微生物的数量＝同一稀释度的3个平板上菌落平均数 × 稀释倍数／含菌样品克数。 3．试验结果 ×104 cfu/g，2#土样中的芽孢杆菌的数量最少，仅有0.67×104 cfu/g，约是3#样的1/3。1#和4#样的含量基本上一样。 根据菌落特征观察个土样芽孢杆菌分离的结果见表2。 表2 不同土样分离芽孢杆菌数量 土样原始编号 备注（肉眼观察） 重 复 芽孢杆菌含量（×10cfu/g） 均值（×10 cfu/g） Ⅰ 2.10 6种菌 Ⅱ Ⅲ 2.20 2 Ⅰ 0.60 7种菌 Ⅱ Ⅲ 0.30 3 Ⅰ 2.40 5种菌 Ⅱ Ⅲ 2.05 4 Ⅰ 1.55 6种菌 Ⅱ Ⅲ 1.80 以下是几种代表性菌株菌落图： 图1