猪蓝耳病病毒通用RT—PCR检测方法的建立及应用.PDFVIP

2011，45(12)：13—15，34／张燕霞，等 中国兽药杂志 ·13· 猪蓝耳病病毒通用 RT—PCR检测方法的建立及应用 张燕霞，吴发兴，刘 爽，郑 辉，张 志，李晓成 (中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛 266032) [收稿 日期]2011—10—11 [文献标识码】A [文章编号]1002—1280(2011)12—0013—04 [中图分类号]8858．28 [摘 要] 参考 Genbank发表 的美洲型猪蓝耳病病毒 (PorcineReproductiveandRespiratory SyndromeVirus，PRRSV)VR一2332、CH一1a、JXA1等毒株的主要结构蛋白基因序列，设计了一对 引物，扩增 目的片段为690bp，进行了RT—PCR检测方法的特异性、敏感性、重复性试验，建立了美 洲型PRRSV通用RT—PCR检测方法。应用此方法对2009年 1—12月收集的126份临床样品进行 了检测，检出率达44．4％。符合性检测结果表明，该方法比高致病性PRRSV检测方法具有更广的 监测范围。该方法具有特异、敏感、重复性好等优点，可用于PRRSV的临床发病检测及流行病学监 测等工作。 [关键词] 猪繁殖与呼吸综合征病毒；ORF6～7基因；RT—PCR EstablishmentandApplication ofUniversalRT——PCR DetectiveM ethodforPRRSVirus ZHANGYan—xia，WU Fa—xing，LIUShuang，ZHENGHui，ZHANGZhi，LIXiao—cheng (ChinaAnimalHealthandEpidemiologyCenter，Qingdao，Shandong266032，China) Abstract：AccordingtotheORF5—-7genomicsequenceofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus publishedinGenbank，andusingthePrimer5．0software，apairofprimersweredesigned，htemotivefragment ofamplificationwas690bp．AnuniversalRT—PCR detectivemethodofspecificity，sensibility，reproducibility wasestablished．Themethodhadsomeadvantagessuch asfast，specific，sensitiveandrepeatable．Themethod wasusedtodetect126clinicsamplescollectedfrom JanuarytoDecember，2009，thepositiveratewas44．4％． ConformancetestresultsindicatedthatthismethodhadawiderdetectedrangethanthehighlypathogenicPRRSV RT—PCR method．Th eresuhsshowedthatthismethodwasspecific，sensitive，repeatableandcanbeusedto detectandsurveilleepidemiologicalAmerican—typePRRSV． Keywords：porcine reproductive andrespiratory syndromeviurs；ORF 6 ～7 gene；reverse transcription — polymerasechainraction 猪繁殖与呼吸综合征 (PorcineReproductive 病首次报道于美国，随后在北美、欧洲及亚洲各国 andRespiratorySyndrome，PRRS)，又称猪蓝耳病， 和地区迅速蔓延，目前 已成为一种地方性流行 是由猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)引起的一 病 。1996年，我国的郭宝清首次分离到该