肉鸡感染禽网状内皮组织增殖病.PDFVIP

维普资讯 一 37一 卿 哟 中周动物检疫2008年第25卷第6期 栏 目主持人：袁丽萍 ylp652@h。nn ．。m 文章编号：1005—944X(2008)06—0037—03 肉鸡感染禽网状内皮组织增殖病 的诊断及流行病学分析 赵丽青 王树峰 吕 朋 吴延功 ’ (山东出入境检验检疫局 青岛 266000) 禽 网状 内皮组 织 增殖病 病毒 1．1．1 发病鸡 山东省胶东地 区某 1．4．1 取 出96孔板 ．倾去上清 ．用 (REV)~l起鸡 、鸭、鹅 、火鸡及其它禽类 肉鸡集 团公司的肉种鸡和商 品鸡 PBS洗涤一次 ．倒置在滤纸上凉干 ． 的网状 内皮组织增殖病 (RE)．它是 以 1．1．2 待检血清 采 自有新城疫感 每孔加入预冷的固定液 100u1．在室 急性网状细胞肿瘤形成 、矮小综合征、 染史 的肉种鸡及商 品鸡 温下固定 10min 淋 巴组织和其它组织的慢性肿瘤形成 1．1．3 PCR所用试剂 10x缓冲液 、 1．4．2 将固定液倾去 ．干燥 用PBS洗 为特征 的一群病理综合征 ．由于病毒 MgC12 (2．5mmol／L)、4xdNTP、Taq酶 涤 1次 ．加入抗 REV的单抗 11B118 引起 的肿瘤 以网状组织增生为特征 ． (1U／~L)均购 自大连宝生物工程 公 (1：80)100ul，37~C反应 50min。 因此称为禽网状内皮组织增殖病 司 。 1．4．3 倾去单抗．用PBS洗3次．每次 1958年英 国的Robinson首次从 1．1．4 抗 REV群特异性单克隆抗体 3min．加入 PBS稀释的工作浓度为(h 一 只死于类似淋巴细胞增生和浸润的 由山东农业大学崔治中教授惠赠 64)的羊抗 鼠荧光二抗 5Ou1．37cc反 神经损伤的火鸡的内脏淋 巴瘤中分离 1．1．5 FITC一羊抗 鼠荧光二抗 美 国 应 50min。 到第一株 REV病毒——REV_T株 此 Signla公司产 品．使用时按使用说明 1．4．4 倾去荧光二抗 ．用 PBS洗 3 后，在澳大利亚、匈牙利、南非、英国、德 书稀释至 1：64的工作浓度 次 ．每次 3rain，弃 PBS．在滤纸上千 国和 日本等国相继分离到不同的REV 1．2 ELISA诊 断试剂盒 由中国动 燥后．置于荧光显微镜下观察。 毒株[I]。我国于 1986年首次报道．何宏 物卫生与流行病学 中心动物外来病 1．5 PCR方 虎等 (1988)利用鸡胚成纤维细胞 研究中心研制 ．按使用说 明书使用 。 1．5．1 组织 DNA 的提取 取病鸡 的 (CEF)从 自然病例中分离出我国第一 1．3 病理组织学检查 取 1o％中性 肝脏 1克．剪碎后用 2倍体积的0．01 株禽 网状 内皮组织增殖病病毒—— 福尔马林固定的肝脏 、脾脏 、肾脏和腺 nlol／L的PBS悬浮．用研磨器研磨后分 REV—C45毒株 ．证实了该病在我 国确 胃，常规法制备石蜡切片(厚度为5u1)． 装 ．加 6uIL／的蛋 白酶 K．56~C作用 10 实存在9[j，以后调查发现山东、江苏、北 用苏木精一伊红染色法 (H．E．)染色．光 h．然后 DNA提取试剂盒直接提取 京、黑龙江等地也有 REV存在7-．3]。到 镜下观察并拍照 1．5．2 PCR反应：根据 已发表 的REV 目前为止．研究发现在许多国家 的商 1．4 间接免疫荧光方法 将疑似病 LTR序列 【．设 计 如下引物上游 品鸡群和火鸡群都存在 REV抗体 (或 鸡剖杀 ，取肝脏 、脾脏 、肾脏和腺 胃用 5℃ATACTGGAGCCAATGGTY3．F游 病毒)，只是检 出率不一致而 已，也就 灭菌 PBS(1：5)研磨 ．然后 以 10000r／5AATGTTGTAGCGAAGTACT3 操作 是说．REV呈世界性分布 本病的危害 min离心