SsnA）活性检测及其基因序列的克隆与.PDFVIP

维普资讯 922 中国兽 医学报 2007年 l1月 第27卷 第6期 ChinJVetSciNov．2007 Vo1．27 No．6 猪链球菌 2型分泌性核酸酶A(SsnA)活性检测及其基因序列的克隆与 测序分析 张 东 ，王楷成 ，汤 明。，黄保续 ，范伟兴 (1．西南大学 动物科技学院，重庆 4007152；2．中国动物卫生 与流行病学 中心，山东 青岛 266032；3．重庆市动物卫生监督总站 ，重庆 401147) 摘要 ：对 8株猪链球菌2型重庆分离株的核酸酶A全基 因进行克隆测序 ，结果表 明该基 因长度为 3126bp，与Gen— Bank发表 的唯一的该基 因的序列相比，核苷酸 同源性高于98 ，推导的氨基酸 同源性高于94 。根据核酸酶A基 因的测序结果建立扩增片段长度为 301bp的PCR检测方法 ，并用 甲苯胺蓝 DNA酶琼脂对猪链球菌分泌性核酸 酶A的活性进行检测 。检测 了从病猪 内脏分离的猪链球菌致病株 35株 ，33株核酸酶 A基 因PCR检测阳性 (阳性 比 例为94．3 )，其 中有 24株分泌活性检测为阳性 (阳性 比例 68．6 )；正常猪扁桃体分 离株 14株 ，PCR检测为阳性 的 1O株 (阳性 比例 71．4 )，其 中有核酸酶 A分泌活性为 8株(阳性 比例 57．1 )，检测菌株 中有 2型猪链球菌44 株 ，38株扩增 出核酸酶 A基 因的片段 PCR检测阳性并且分泌活性为阳性的有 32株，猪链球茵 1型、7型、9型、13 型、1／2型各 1株 ，均能扩增 出核酸酶A基 因的片段 ，但只有 13型猪链球菌有核酸酶 A分泌活性 。对猪链球菌在不 同生长时期核酸酶活性的检测显示，猪链球菌在培养 4、8、16、32、48h均有核酸酶 A 的分泌，并且 ca 和 Mg外为 分泌性核 酸酶A 的活性必需 因子。 关键词 ：猪链球菌；链球茵核酸酶A；核苷酸序列测定；活性检测 中图分类号：$852．61；Q78 文献标识码 ：A 文章编号：1005—4545(2007)06—0922—05 ActivitydetectionandnucleotidesequencingofStreptococcussuisDnaseA (SsnA) ZHANG Dong 。W ANG Kai—cheng ，TANG M ing。，HUANG Bao—XU ，FAN W ei—xin (1．AnimalScienceCollege，SouthwestUniversity，Chongqing400715，China；2．ChinaAnimal HealthandEpidemiologyCenter，Qingdao，Shandong266032，China；3．ChongqingAnimal HealthSupervisionGeneralStation，Chongqing401147,China) Abstract：Inthisstudy，theSsnA from the8strainsofStreptococcussuisserotype2Chongqingisolateswasam— plifiedbyPCR using3pairsofprimer．NucleotidesequencingandanalysisresultsrevealedthattheSsnA genewas 3 126bp．ThesimilarityofSsnA geneandam inoacidfrom 8Chongqingisolateswasmorethan98 and94 ，re— spectively．TheSsnA genewasdetectedbyPCR withtheexpectedsizewas301bpandtheS．suisnucleaseactivity wasdetected．Theresultsshowedthat35pathogenicSreptococcussuisstrainsfrom