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生理学报 Acta Physiologica Sinica, February 25, 2010, 62 (1): 49-54 49 研究论文 活化素抑制大鼠垂体GH 细胞中人生长激素基因启动子的活性 3 * 龚凤英 ，邓洁英，朱惠娟，潘慧 中国医学科学院 北京协和医院内分泌科，卫生部内分泌重点实验室，北京 100730 摘 要：本研究旨在探讨活化素(activin)对大鼠垂体GH3 细胞中人生长激素(hGH)基因启动子活性的影响及其可能的调节机 制。采用荧光素酶报告基因方法。首先建立含hGH 基因启动子(-484~+30 bp)和荧光素酶融合基因的稳定转染GH3 细胞株， 然后加入活化素或同时加入活化素与相关信号转导途径的激动剂，通过检测细胞培养液和细胞裂解液中GH 的含量，以及 GH3 细胞内荧光素酶的变化，反映活化素对GH 分泌、合成和hGH 基因启动子活性的影响。将含不同长度hGH 基因启动 子序列的荧光素酶表达质粒分别转染GH3 细胞，观察它们对活化素的反应，寻找活化素影响hGH 基因启动子活性的关键 DNA 序列。结果表明，活化素(5, 50 nmol/L) 能抑制大鼠垂体GH3 细胞中GH 的分泌和合成，活化素(5, 50 nmol/L)还能够 抑制GH3 细胞中hGH 基因启动子的活性，使之仅达对照组的77% 和69% ；在胞内信号转导激动剂中，丝裂原活化蛋白激 酶激酶(MAPKK/MEK)特异性激动剂C6 ceramide (1 μmol/L)完全取消了活化素对hGH 基因启动子活性的抑制作用；活化素 发挥抑制作用所需要的hGH 基因启动子关键序列位于-132~-66 bp 之间。上述研究表明，活化素能抑制大鼠垂体GH3 中hGH 基因启动子的活性，它可能是通过抑制细胞内依赖MAPK 的信号转导途径来完成的，同时hGH 启动子上-132~-66 bp 的序 列在其中发挥重要的作用。 关键词：活化素；生长激素; 启动子；GH 3 细胞；丝裂原活化蛋白激酶激酶 中图分类号：R322.5+4 Activin inhibits the promoter activity of human growth hormone gene in rat pituitary GH3 cells * GONG Feng-Ying , DENG Jie-Ying, ZHU Hui-Juan, PAN Hui Department of Endocrinology, Key Laboratory of Endocrinology of Ministry of Health, Peking Union Medical College Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences Peking Union Medical College, Beijing 100730, China Abstract: The present study was aimed at investigating the effect of activin on the activity of human growth hormone (hGH) gene promoter in rat pituitary GH3 cells and the underlying molecular mechanism. The method of luciferase reporter gene was used. We firstly established a stable GH3 cell line which contains hGH gene promoter (-484 to 30 bp) and luciferase reporter gene by transfecting pGL3-484-Luc2 luciferase expression plasmid into GH3 cells using Lipofectamine transfection reagent. After treating these cells with activin o