奇异球菌在pca及pcb内生长的差异.doc

奇異球菌在PCA及PCB內生長的差異 簡介： 當我們利用平板技術肉湯(m plate count broth；PCB)來培養細菌時，可以發現菌數會成長到一定的密度，之後便不會再增加。我們把這樣的生物特性稱為數量感應(Quorum sensing)。另外，在平板技術瓊脂(plate count agar；PCA)上培養細菌，我們可以發現一個菌落中，是數個細菌緊密地疊在一起的。以密度來看，在PCA上的一個菌落中，疊在一起的細菌勢必比在PCB中懸浮的細菌密度要大，不過在PCA上這樣的菌落仍然能繼續變大，反應出PCA上的菌落中的細菌似乎沒有表現出如之前所提到的數量感應特性。這兩種情況之間勢必存在著一些差異。如果能了解影響數量感應的關鍵，或許我們能針對這個因素進行突破，使奇異球菌的生長能突破原來的極限值(約2*108個/ml)。 首先觀察細菌在兩種環境中的差異之後，我們可以做一些假設：1. 奇異球菌在PCB中生長時，會因為容器搖晃使得細菌與細菌之間會有一定程度的碰撞，這樣的碰撞會影響細菌的生長；反之，在PCA上的細菌是很平靜地一個一個疊起來，碰撞較少。因此在PCA上的菌落能夠不斷的變大。2. PCA上的細菌進行分裂後，其子代細菌便待在原來的細菌旁邊。不過在PCB中的細菌，隨時會與跟自己關係很遠的細菌相遇，或許它會對關係較疏遠的細菌產生排斥感，影響到自己的生長情形。3. 在PCB當中生長的細菌，雖然能獲得的養分充足，不過細菌代謝所產生的廢物也混合在PCB中，廢物太多會使細菌無法生長，不過在PCA上，代謝物似乎更不易與菌體隔離，故這點不足以成為兩環境的差異性。不過代謝物的多寡本身是可以成為影響細菌生長的指標的。對於這幾點因素，進行了一些實驗，希望能找出並了解影響細菌生長的要素。 材料： 實驗菌種是Deinococcus radiodurans IR，生長環境是32。C。液體的培養基是使用plate count broth（PCB；每公升含5g的酵母抽出物，1g的trypton，2g的dextrose；Difco）。固體的培養基是使用plate count agar（PCA；每公升含2.5g的酵母抽出物、5g的digset of Casein，1g的dextrose，15g的agar；Difco）。試管培養是在往復振盪培養箱（reciprocating shaker incubator model-S401R，120rpm）。平板培養是在incubator model RI-102。緩衝溶液是磷酸緩衝溶液（phosphate buffer；PB；0.067M，pH7.0，每公升含4.73g的Na2HPO4及4.54g的KH2PO4），作用為菌液的稀釋。 實驗步驟： 更換培養基 自一管達平衡濃度的菌液中取100微升，加入10毫升的PCB，在攝氏32度下搖晃培養，每十二小時取樣測菌數。 培養達第三天時，將此菌液離心並且除去上清液，加入新的PCB繼續培養，每十二小時取樣測菌數。同樣的方法，但是將試管培養改成用15毫升離心管培養；培養箱的搖動不致使此菌液完全混合，菌會沉澱在管底。 分管混合培養 自一管達平衡濃度的菌液中取100微升，加入10毫升的PCB，在攝氏32度下搖晃培養，同樣的方法做三管，標示A1、A2、A3，每十二小時取樣測菌數。 培養達第三天時，自 A1中取出120微升加入100毫升PCB，標示B1；同樣的自A2、A3分出菌，標示B2及B3。自A1及A2各取60微升加入100毫升PCB，標示B12；同樣的方法製作B13及B23。自A1、A2和A3各取40微升加入100毫升PCB，標示B123。B組也在攝氏32度下培養，每十二小時取樣測菌數。 實驗記錄： Sheet3 Sheet2 Sheet1 Chart1 4.13 4.30 4.33 4.25 3.00 6.22 5.48 5.78 5.83 3.00 6.54 6.22 6.35 6.37 3.00 7.11 6.95 6.87 6.98 3.00 7.36 7.15 7.70 7.40 3.00 7.51 7.83 7.66 7.67 3.00 7.88 7.68 7.88 7.81 3.00 7.68 7.45 7.52 7.55 3.00 7.76 7.03 7.50 7.43 3.00 6.97 6.53 6.80 6.77 3.00 4.42 4.33 4.50 4.42 3.00 6.24 5.35 6.24 5.94 3.00 6.69 7.06 6.85 6.87 3.00 7.45 7.10 7.18 7.24 3.00 7.84 7.56 7.49 7.63 3.00 7.56 7.68 7.76 7.67 3.00 7.74