防污染多重pcr扩增试剂盒-江苏然科生物技术有限公司.pdf

防污染多重 PCR 扩增试 剂盒 防污染多重 PCR 扩增试剂盒 使用说明书 （Cat#RK003-8 ） 【产品介绍】 尿嘧啶-N-糖基化酶(UNG)酶能选择性水解含有dUTP的双链或单链DNA 中 的尿嘧啶糖苷键，形成有缺失碱基的DNA链，在碱性介质以及高温下会进一步 水解断裂，从而被消除。UNG酶的最佳活性温度为50℃ ，95℃灭活。本试剂盒 中使用dUTP和UNG酶的组合可防止PCR产物造成的遗留污染。 本试剂盒快速简便，可用于对污染要求较高的多重PCR ，多重RT-PCR以及 其他PCR相关的实验工作。2×PCR Master包括3mmol/L MgCl 、400µmol/L dNTP 、 2 0.24U/µl Taq DNA polymerase。本试剂盒扩增得到的PCR产物3端附有一个“A” 碱基，因此可直接克隆于T-Vector 中。经过优化的PCR Master使大多数PCR反应 都能很好的进行。PCR反应混合物的配制只需加引物、模板和双蒸水，由于使用 热启动Taq酶，配制可在几分钟内完成并且不受温度和配制时间长短影响。 影响 PCR 反应的因素很多，即使使用经高度优化的 PCR Master 也会遇到问 题。如果发现 PCR 反应没有得到所需产物或条带较弱，建议使用试剂盒中提供 的 25mmol/L MgCl2 调节反应体系中的 Mg2+浓度，以期获得更好的结果(通常 Mg2+浓度不要超过 2.5 mmol/L)。另外 ，多重 PCR 中使用引物的 Tm 值要尽量接 近，引物对之间尽量避免互补，这样才可能保证各扩增产物的效率基本一致。 【产品特点 】 1.简单便捷：操作简便、快速、耗时少。PCR反应混合物的配制只需加引物、 模板和双蒸水，配制可在几分钟内完成并且不受温度和配制时间的影响。 江苏然科生物技术有限公司 防污染多重 PCR 扩增试 剂盒 2.效率高 ：抗干扰能力强 ，经过优化的PCR Master使大多数PCR反应都能很 好的进行，产物量大、稳定、可靠。 图 1 用本试剂扩增的人基因组不 同基因片段的结果。Lane1:人 SRY 基因单引物扩增结果 （137bp ）；Lane2: 人 β-globin 基因单引物扩增结果（268bp ）；Lane3: 人 p53 基因单引物扩 增结果（402bp ）；Lane4: 人 β-半乳糖苷酶基因单引物扩增结果（680bp ）；Lane5: 人线粒体 DNA D-Loop 区单引物扩增结果（1500bp ）；Lane6: 上述五种片段同时扩增的多重 PCR 结果 ； M: mark。 【试剂盒组成 】 组分 数量 防污染多重 2×PCR Master 625µl MgCl2 （25mmol/L ） 250µl ddH O 1ml 2 操作手册 1 份 【规格 】50T/盒 【贮藏与 有效期 】防污染多重 2×PCR Master-20℃保存 ，有效期12 个月。开盖 后 ，4℃保存有效期 1 个月。 【注意事项 】 1、PCR 反应条件视仪器条件不同而各异。推荐变性温度为 98℃ 5-10 s 或 94℃ 江苏然科生物技术有限公司