14.1生化药物分析和生物检定技术.pptVIP

定义： 指运用生物化学的理论、方法和技术，从动、植物等生物体中提取分离的天然活性物质，以及这些物质及其衍生物的化学合化、半合成和现代生物技术制得的产品。;常测定： 氨基酸及其衍生物、药用活性多肽、药用蛋白、药用酶、辅酶、核酸及其降解产物和衍生物、多糖和脂类药物、基因工程DNA重组药物等。 优点： 易被机体吸收，针对性强，疗效可靠，毒副作用小，营养价值高等。;一、生化药物分析的特点 1、分子量不确定性 (1)只有氨基酸、核苷酸、辅酶、甾体 激素等化学结构明确的小分子化合 物，分子量确定。 (2)大多分子量不确定，结构不确定 因此，生化药物常需进行纯度及分子量测定。;2、分析项目的特殊性 (1)除采用理化法分析外,尚需用生物 检定法进行检定,以证实其生物活性 (2)因易引入杂质，常需做热源、热 敏、异常毒性、安全性试验 (3)多用含量测定表示主药含量，但酶 类需进行效价/酶活力测定，来表 示有效成分含量。;3、分析方法的多样性 如：理化、生化、生物检定法等。;二、生化药物分析的方法 1、鉴别 (1)化学反应法 (2)UV (3)酶法：如尿激酶-蛋白水解酶 (4)电泳法：如肝素-糖凝胶电泳法 (5)生物法：利用生物体进行试验;2、杂质检查 (1)一般杂质 (2)特殊杂质 3、安全性检查 (1)热原检查：由微生物所分泌的某一种代谢产物，一般以为是内毒素，能使恒温动物体温升高。 方法：家兔法/鲎试剂; (2)异常毒性试验 用一定剂量药物按指定的操作方法和给药途径给规定体重的试验动物，观察其急毒反应(是否死亡)，是一个限度试验。 异常毒性试验出现： 主要取决于供试品在生产中是否引入，可发生异常毒性杂质。;(3)过敏试验 检异性蛋白试验----引起多种过敏反应 轻:皮肤产生红斑/丘疹 过敏 重:窒息、发绀、血管神经性水肿 血压降低、休克、死亡。;(4)降压物质检查 指药物中含有能导致血压降低的杂质，包括组胺、类组胺或其他物质。 来源：用动物脏器/组织制备时，在正常组织中存在。 方法：猫/狗血压法检药物中所含降压物质。;(5)无菌检查 对药物及???料是否染有活菌的检查。 由于许多生化药物不能高温灭菌，故检查此项。;4、含量/效价测定 表示方法： (1)含量百分比：适用于化学结构明 确小分子/经水解后变成小分子药物。 (2)生物效价/酶活力单位表示，适于酶类、蛋白质类。;常用方法： (1)酶法 (2)电泳法 (3)生物检定法 (4)理化法;(1)酶法 ①酶活力测定法： a.终点法：单酶反应定量法 指示酶反应偶联定量法 b.取样测定法 c.连续测定法 ②酶分析法： a.动力学分析法 b.总变量分析法;(2)电泳法 ①自由界面电泳法 ②高效毛细管电泳法 ③区带电泳法 a.纸电泳法 b.醋酸纤维素薄膜电泳法 c.聚丙烯酰胺凝胶电泳法 d.十二烷基硫酸钠(SDS) 聚丙烯酰胺凝胶电泳法;(3)生物检定法 是利用药物对生物体的作用以测定其效价或生物活性的一种方法。 以药物的药理作用为基础，生物统计为工具，运用特定的实验设计，通过供试品和相应的标准品或对照品在一定条件下比较产生特定生物反应的剂量比例，来测得供试品的效价。;(4)理化法 ①重量法 a.提取法 b.挥发法 c.沉淀法 ②测定法 ③比色法 ④UV;⑤高效凝胶过滤色谱法 a.分离根据有效粒径 b.分离在固定比例水液中 c.活性蛋白可回收; ⑥高效离子交换色谱法 a.分离根据离子化浓度 b.分离盐浓度增大的梯度洗脱法 c.分离在阳/阴离子交换间呈现差异大 d.柱效中等并具高质量的活性回收;三、生化药物分析进展 总体向理化/仪器分析发展 如：GC、HPLC、UV、TR、质谱、磁共振、超离技术、放射免疫、酶试剂、酶电极检测等。 另，应用细胞培养，对生化药的活力和效价检测。 单克隆体免疫分析技术及基因分析技术，提高检测限量和灵敏度。;生物检定技术;一、定义;二、检查方法;一、平皿法;一、平皿法;一、平皿法;一、平皿法;一、平皿法;一、平皿法;一、平皿法;一、平皿法;一、平皿法;一、平皿法;一、平皿法;一、平皿法;一、平皿法;一、平皿法;一、平皿法;一、平皿法;一、平皿法;一、平皿法;一、平皿法;一、平皿法;二、薄膜过滤法;二、薄膜过滤法;二、薄膜过滤法;生物检定技术;;1．仪器与用具; 2．试剂