电针对力竭游泳大鼠肾脏线粒体自由基代谢及线粒体功能影响.docVIP

电针对力竭游泳大鼠肾脏线粒体自由基代谢及线粒体功能影响(1.河南省体工大队医务所,郑州450003;2.河南中医学院针推系)[摘　要]　目的:进一步研究电针的抗过氧化、抗衰老作用,探讨肾俞平衡阴阳、益精补肾机理。方法:选择7组大鼠做力竭游泳实验,观察力竭前后不同时间及有无电针刺激条件下大鼠肾脏线粒体自由基代谢情况和线粒体功能的变化。结果:发现力竭游泳后即刻和4小时末MDA,GSH,NADH,游离Ca2+,THG,GSH?Px均有不同特点、程度的变化;电针组大鼠游泳耐力时间明显长于未电针组(P0.05),4 h后的C组含量已恢复至运动前水平。此实验结果与有关报道一致?[9]。相应的经电针刺激的CA组GSH?Px含量较运动前已显著升高(P0.01),与C组含量相比,也存在显著性差异(P0.05)。观察结果发现,力竭游泳后GSH?Px活性是先略有下降,后逐渐上升。 力竭游泳后,线粒体内巯基含量下降特点同MDA巯基对于维护线粒体膜的完整性有重要意义。 线粒体内NADH荧光值运动后即刻下降显著(P0.05),意味着线粒体内还原当量水平下降。?4 h末的C组下降已不显著,说明其恢复较快。BA、CA组因电针作用阻止了NADH的过度下降。 线粒体内游离Ca2+浓度运动后即刻下降极显著(P0.01)源于Ca2+的过膜外流。4 h末C组含量与B组水平相当,但仍较A组有显著下降(P0.05)。电针后的BA较B含量大(P0.05),CA较C更有显著增加(P0.01)。 3　讨论 脂质过氧化物丙二醛(MDA),可作为评价自由基生成及对膜脂质双分子层破坏的指标。本实验结果表明,大鼠力竭游泳后肾脏线粒体MDA含量显著增加,说明力竭时自由基大量积累。另外对抗自由基生成的GSH含量也持续显著下降。GSH的抗过氧化作用与GSH?Px活性密切相关。GSH?Px是一种含硒的过氧化物酶,它可催化H2O2与GSH反应,生成氧化型谷胱甘肽,从而分解H2O2,防止产生毒性很强的羟自由基。其活性相对于自由基的生成有一定的滞后性,故力竭运动后GSH?Px呈现先下降后缓慢回升,数小时后反馈激增的趋势。GSH一直处于被消耗状态,其含量持续下降。中医传统观点认为,肾俞可平衡阴阳,益精补肾。实验发现电针刺激“肾俞”后机体抗过氧化系统能力得以加强,自由基生成减缓,故自由基的积累及其危害减弱。提示电针有利于机体自由基生成与消除之间尽快达到平衡,避免较大生理危害的发生,这是电针肾俞平衡阴阳的可能机制之一。益精补肾作用的机制可能是促使机体在应激状态下迅速有效地产生GSH?Px等抗自由基物质,保护肾脏线粒体功能,阻断一系列机体过氧化反应所致的紊乱。 衡量线粒体膜完整性的直接指标常为其表面的巯基含量。当巯基被自由基氧化。含量下降时可导致膜的完整性破坏,Ca2+外流,以致实验所测线粒体内游离Ca2+浓度急速下降。电针组(BA、CA组)Ca2+浓度因电针刺激加强了机体抗过氧化能力,减少了自由基的生成积累,使线粒体膜得到了一定的保护,Ca2+外流被抑制而显著高于未电针组(B、C组)。实验还发现,电针可减缓力竭运动对NADH的消耗。NADH是线粒体内最直接的质子供体,巯基要保持其还原状态,必须有充分的质子供应。这是电针作用保护线粒体膜完整性的又一可能机制。 线粒体内Ca2+浓度下降,可使线粒体内NADH含量下降,还原当量水平降低。这是因为线粒体内NADH主要来源于底物的氧化脱氢反应,比如谷氨酸、异柠檬酸、丙酮酸、α?酮戊二酸等在脱氢酸作用下,脱下的氢为NAD?+所接受,生成NADH。有3种重要的脱氢酶:丙酮酸脱氢酶(PDH)、NAD?+?异柠檬酸脱氢酶(NAD?+?ICDH)和α?酮戊二酸脱氢酶(OGDH)可被Ca2+激活。此3种酶统称为Ca2+敏感脱氢酶。Ca2+浓度下降,Ca2+敏感脱氢酶含量也下降,必然导致NADH的减少。所以Ca2+可通过对线粒体内重要脱氢酶的作用来调节线粒体的氧化代谢,而且此调节无需ADP/ATP比值的变化。Korestsky等[10]的实验表明:线粒体内还原当量NAD(P)H是调节线粒体氧化代谢的重要环节。当线粒体外ADP保持恒定,NADH荧光值升高时,耗氧量也明显升高,氧化代谢能力增强,二者呈线型关系。电针可有效抑制Ca2+外流,NADH荧光值下降。线粒体内较高的游离Ca2+通过对敏感脱氢酶的激活,可使NADH含量有效上升,还原当量水平提高,ATP合成率、氧化代谢能力增加。大鼠(电针组)耐力游泳时间亦加长。 4　结论 本实验发现,电针双侧“肾俞”,大鼠肾脏线粒体自由基病理变化减轻,运动能力加强,疲劳延缓。这可能与电针可对自由基的生成、积累产生抑制,加强抗过氧化能力,保护巯基免受自由基攻击,有效抑制线粒体内游离Ca2+外流,