溴化氰－气相色谱法测定硒蛋氨酸的研究（）.pdf

溴化氰-气相色谱法测定硒蛋氨酸的研究 （） —— 痕量硒蛋氨酸的测定* 吴 江* 欧阳政 暨（南大学化学系，广州） [提要]提出痕量硒蛋氨酸测定方法— CNBr—piaselenole—狦GC法。在还原剂存在下， 硒蛋氨酸与CNBr定量反应生成CH3SeCN，经CHCl3萃取后消化成Se(IV),继而用气相色谱 法测定Se(IV)，以间接测定硒蛋氨酸，共存的无机硒、硒胱氨酸无干扰，本法回收率为93.1 5.4％，可用于测定生物体中PPb级硒蛋氨酸而无需酸水解等过程。 硒蛋氨酸(Seet)是普遍存在于某些生 于棕色瓶中，加1cm厚甲苯覆盖表面，贮存 物体中的含硒氨基酸，它总是与蛋氨酸 于冰箱中。4.混合酸：3份无硒硫酸 优（级 M（et）共存，且含量极微。目前，分离测定 纯）+4份高氯酸 优（级纯）。 硒蛋氨酸的方法有气相色谱法[,2]，缴 二（）仪器及工作条件 SP-2308气相 -中子活化法[3]和离子交换法[4]，但上述 色谱仪 北（分厂），ECD(6Ni),1m 3mm 方法灵敏度不够，且共存氨基酸干扰严重， 玻璃柱，固定液为15％SE-30，担体为101酸 难以用于痕量硒蛋氨酸的定量分析。 洗白色担体，柱温195 ，检测与进样温度 我们曾提出用气相色谱测定硒蛋氨酸与 280 ，高纯氮(99.999％)45ml/min。 CNBr反应产物CH3SeCN以间接测定硒蛋氨 三（）操作步骤 量取1.00g/ml或（0.1 酸[5]，其最小检测量为8 10-9gSeMet，尚 g/ml）硒蛋氨酸溶液1.0ml置于10ml带塞 不能检测ppb级痕量硒蛋氨酸。本文研究了 试管中，加0.1ml1％SnCl2溶液及0.5ml2％ 把挥发性产物CH3SeCN消化成Se(IV)，然 CNBr试剂。室温反应5小时后加入等体积 后用气相色谱检测Se(IV)，可把灵敏度提高 CHCl3振摇1分钟，吸取下层CHCl3相于 3—4个数量级。本法灵敏、干扰极少、适用 60ml具塞三角瓶中，加3ml混合酸和1ml5％ 性广，用这种方法测定了若干生物样品中痕 Na2MoO4溶液，具塞振荡10分钟，置沙浴 量硒蛋氨酸，结果满意。 上逐渐加热至180 ，在此温度下消化至溶液 呈黄色即达终点，立 即取下冷却，加入 实 验 部 分 25ml蒸馏水和1ml1％NPDA溶液，60℃加 一（）试剂? 1.2％CNBr0.1mol/LHCI 热半小时，用3ml甲苯萃取硒络合物，弃去 液溶；1％SnCl20.1mol/LHCl溶液；1.0g/ 水相，进样1—2l。色谱图见图1。 ml和0.1g/ml硒蛋氨酸0.1mol/LHCI溶 标准曲线制作：取0.1g/mlSe(IV)标准 液；5％Na2MoO4溶液；氯仿和甲苯。2.硒 液0.1,0.5,1.0,2.0,1.0ml,各加入1ml6mol/L 标准溶液：称取 140.5mgSeO2 分（析纯）溶 盐酸，加水稀释至30ml，加入1ml1％NPDA 于100.0ml蒸馏水中，配成1.0mg/mlse(IV) 溶液反应 （以下同测定步骤），以进样量对 的贮备液，再用水稀至0.1g/mlSe(IV)溶 Se(IV)峰高作标准曲线。 液。3.1％?4-硝基邻苯二胺 N（PDA）盐酸溶 液：把1.1gNPDA(Sigma)产品溶于100ml 国家自然科学基金资助课题一部分。 1mol/LHCI中，用10ml甲苯洗涤两次，置 现在南京药物研究所。 键。曾试验了1.HNO3; 2.HN