利用激光扫描影像系统对软琼脂和超低粘附板中的3D肿瘤球体.PDFVIP

生命的化学· 632 · , 2014, 34(5): 632-635 《生命的化学》2014年34卷5期 doi: 10.13488/j.smhx术方法 技术方法 利用激光扫描影像系统对软琼脂和超低粘附板中的3D肿瘤球体 或干细胞克隆球体进行快速检测和分析 左洁 (腾泉生命科学（中国）有限公司) 1 介绍 积进行统计而无需对其进行Z层断层扫描，多次采 集数据。 发现新的抗癌药物的研究目前正面临着重要 的挑战，因为在临床前研究显示有效果的化合物 2 方法 只有5 ％的能继续被开发，成为获得许可的药物。 2.1 在超低粘附板中形成肿瘤微球体 传统的2D细胞培养模型在药物发现过程的早期阶 Corining 的超低粘附板，采用不透明的壁和清 段被用于评估候选药物，然而，有越来越多的证 晰、圆形的孔底。专有的超低细胞粘附涂层，具 据表明，在二维单层生长的细胞并不能准确地反 有亲水性、生物惰性的和不可降解的特性，通过 映肿瘤的生物学复杂性。 共价连接到孔底部的内表面上。这种对培养孔底 对兼容高通量筛选的更好的体外模型的需求 部独特的设计，使3D细胞球体培养物可高度可重 引导了3D细胞培养模型的发展，尤其是多细胞微 复地生长。不透明的侧壁和专有板底网格形式的设 球，其将保留肿瘤的许多形态学和遗传性状。在 计大大降低了荧光、冷光背景和孔与孔之间的串 体外实验中，3D培养模型被广泛地认为相比2D形 扰。在孔中，球状体可以生成，培养，并进行荧光 式的培养系统是更加具有生理相关性的模型。3D 或者冷光信号的检测，而无需将球状体转移。目 模型更加准确地反映了体内微环境中的复杂性， 前，Corning超低粘附板具有96孔和384孔板形式， 并被用于许多的研究领域，比如肿瘤学[1] 、肝脏毒 这两种板型都很方便进行自动化。 [2] [3] [4] [5] 性 、神经生物学 、胰腺研究 、肾脏学 ，以及 (a) 将悬浮于完全培养基中的肝癌细胞株HepG2 的 干细胞研究[6] 。这些研究颠覆了我们对体外培养中 单细胞铺板于Corning超低粘附板中(， 以及体内的细胞行为学的认识。然而，由于细胞 铺板密度为96孔板每孔200 µl含有300个细胞，384 培养技术的限制，以3D培养系统进行高通量筛选 孔板中每孔50 µl含有300个细胞。 却发展地非常缓慢。技术瓶颈包括实验的异质 (b) 在24 h 内，悬浮的细胞将组装成单个3D微球， 性、低通量、难以实现自动化以及昂贵的成本。 沉淀在细胞中央，如图1A所示。 在这里，我们描述通过两种方法进行3D培养 (c) 72 h后，将50%的培养基更换成含有2倍浓度的 的细胞球体检测：(1) 在超低附着板中；(2) 在半固 Doxorubicin(阿霉素) 的新鲜培养基，更换后终浓度 体琼脂上。这两种方法都可在96和384孔微孔板形 为316 pM~3.16 µM 。 式上进行。 (d) 形成的微球体继续培养6 d 。 我们随后用Acumen hci激光扫描技术进行快 2.2 在软琼脂中形成肿瘤微球体 速的整板图像采集(5 min/块