非洲猪瘟病毒K205R蛋白基因原核表达的研究.PDFVIP

中国动物检疫 2010年第 27卷第 12期 Q 哟 一35一 栏目主持人：胡藕祥 gdwjy@i．。m 非洲猪瘟病毒 K205R蛋 白基因原核表达的研究 龚振华 ，莫正芬z，李 葳 ，李玉清 ，刘开成 ’，史 红 ，刘国庆 ，王君玮 ，蒋正军 ，王志亮 (1．中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛 266032；2．湖南桃江武潭镇中心，湖南桃江 413407) 摘 要：本研究合成非洲猪瘟的K205R基因，将K205R基因克隆至pET．30c(+)质粒，构建重组原核表达质粒 pET30C—K205R。该重组质粒的阅读框架正确，表达的融合蛋白的N端和 c端均带6×组氨酸。pET30C．K205R—BL21 菌株经培养和诱导表达后，可生产K205R可溶性蛋白，K205R可溶性蛋白可用Ni柱纯化。纯化表达K205R蛋白的 ELISA试验证明，表达的K205R蛋白与猪阳性非洲猪瘟血清具有较好的特异性反应。 关键词：非洲猪瘟病毒；K205R蛋白；原核表达 中图分类号：$852．659．1 文献标识码：A 文章编号：1005—944X(2010)12—0035—02 Proka~oticExpression ofK205R Gene ofA．fricallSwineFeverVirus Gong Zhenhua，MoZhengfen，Li、vei，LiYuqing，Liu Kaicheng， ShiHong，LiuGuoqing，WangJunwei，JiangZhen~un，WangZhiliang (1．ChinaAnimalHealth andEpidemiologyCenter，Oingdao，Shandong， 266032 China：2．HunanTaojiang、vutanMiddleSchool，413407 China) Abstract： K205R gene of AFSV was synthesized and cloned to the plasmid pET30C to construct the recombinantprokaryoticexpressed plasmid pET30C．K205R with correctreading frameand with 6×histamineboth on N and C terminals of the expressed fusion protein．The recombinant plasmid pET30C．K2O5R was then transfe—rmed into E．coli DH5o and then into BL21 and the pET30C—K205R．BL21 strain was obtained and expressed by induction with IPTG，resulting in soluable protein K205R．ELISA with the purified K205R protein showedhtattheexpressedK205R protein demonstratedvery good specificreactionwithpositiveASFV serum． Keywords：African swinefevervirus：K205R protein：Prokaryotic expression K205R蛋 白是 非洲猪 瘟 病 毒 1．1 pMD18T．K205R 参考非洲猪瘟 方法，取经酶切纯化的K205R 蛋 白 K205R基因编码 的一种功能蛋 白， 病毒BA71v株基因序列合成K205R 基因DNA和经酶切纯化的pET一30c K205R基因主要在非洲猪瘟病毒感 基因，该基因编码框全长615bp，其编 (+)载体DNA，在T4DNA连接酶作 染宿主细胞 的早期进 行表 达 [1]。 码蛋白全长205氨基酸，分子量约为 用下，于 16℃过夜，连接产物转化大 K205R蛋 白可 以诱导机体产生较强 23．7kD lll。合成 的K205R基 因插入 肠杆菌DH5a 感受态细菌，筛选抗卡 的抗体反应，是病毒感染机体后非洲 pMDl8T质粒 ，即为pMD18