第八章遗传6_872604812.pptVIP

限制性片段长度多态性（RFLP）分析。 （restriction fragment length polymorphisms） 在1987年使汤米·李·安德鲁斯被判强奸罪的两个DNA限制性片段类型。 DNA 连接酶及其连接作用 反转录酶 基因克隆的质粒载体 质粒 克隆载体的要求： 复制起始点 选择性标记 单一切点 较小分子量，多拷贝 安全性高 PBR322 Plasmid 4361 bp 重组DNA的基本步骤 获取目的基因 基因文库　人工合成　反转录　PCR 法 检索 DNA分子的体外重组 重组DNA分子引入宿主细胞及筛选鉴定 目的基因的表达 *影响表达的因素 重组DNA的鉴定 基因工程的应用及相关问题 疫苗生产 制药工业 转基因动物 转基因植物 牛生长激素的生产 突变的诱发 （a）辐射(电离辐射、非电离辐射) UV引发的嘧啶二聚体 （b）化学诱变剂 (c)其他诱变因素 酮式 烯醇式 5-溴尿嘧啶诱发的碱基转换 DNA损伤修复 修复缺陷与人类疾病 Xeroderma pigmentosum(着色性干皮病 ) 三、 基因表达调控 基因的选择性表达是细胞特异性的基础 原核生物的基因表达调控 Jacob.F 和Monod于1961年提出基因调控的乳糖操纵子学说。 大肠杆菌的乳糖操纵子模型 结构基因（structural gene） 调节基因（ regulator gene） 启动子　(promotor ) 操纵基因(operator gene) 操纵子(operon) 乳糖操纵子 操纵基因 调节基因的启动子 调节基因 结构基因 Lac操纵子的启动子 乳糖操纵子 β半乳糖苷酶基因 β半乳糖乙酰 基转移酶基因 透性酶基因 乳糖操纵子 色氨酸操纵子 真核生物的基因表达调控 不同的细胞有特异的基因表达方式 B: bud-dorsal A：bud-side C: 8.5 somite-side D: 8.5-somite-dorsal E: 24h-side F: 24h-dorsal MyoD基因在斑马鱼胚胎中的表达 DNA的包装影响基因的表达 异染色质化与基因表达失活 X染色体携带BL+等位基因 X染色体携带BL-等位基因 黑色毛 黄色毛 X染色体随机失活 巴氏小体 真核细胞的RNA转录后的加工 （1） 断裂基因(Chambon and Berget 70年代中期首先报道) （2） RNA剪接 剪接体的RNA加工 核内小RNA与内含子5‘端配对 剪接体 可变剪接产物 降钙素基因相关肽 降钙素 抗体重链基因 RNA聚合酶 DNA 多聚核糖体 mRNA 核糖体 四、 重组DNA技术 基因工程的相关技术 DNA的变性与复性 分子探针（probe） DNA analysis from gel electrophoresis Southern Blot DNA印记转移 缓冲液 海绵 凝胶 膜 纸巾层 分子量标记 目标片段 温育 洗脱 与目标片段杂交 放射自显影 溴化乙锭 染胶 Northern Blot 原位杂交（in situ hybridization） 聚合酶链式反应 (1)　PCR基本原理 Kary Mullis 1944- 1993年诺贝尔化学奖 (2) Taq DNA聚合酶 (3) 寡核苷酸引物 (4) PCR技术的应用 基因工程主要的工具酶 限制性内切核酸酶