芽孢杆菌几丁质酶的分布和特性.pdf

y 芽璃杆菌足丁质酶蛉分雍及特性 13IIStrIbL量tlOn承nd PrOduced 一 Bae引US by 专业：微生物学 Major：Microbiology 作者：赵秋敏 Author：Zhao QiumiⅡ 导师：陈月华教授 Advisor：ProfessorChen、厂uehua 南开大学生命科学学院 ofLife CoⅡege Sciences，Nankai University 2006．5 摘要 要 为开发芽孢杆菌中的几丁质酶资源，利用胶体几丁质平板检测了524株 芽孢杆菌。全部菌株能够在平板上生长，4096的菌株能形成水解圈。设计～ 对特异引物，利用PCR方法检测524株芽孢杆菌的几丁质酶基因，阳性率为 93．5％。实验分别从酶水平和基因水平证明芽孢杆菌中蕴含着丰富的几丁质 酶资源。 对峙法检测了180株产水解圈较大的芽孢杆菌对小麦赤霉病菌的抑制 作用。结果表明具有抑真菌活性的菌株仅占33％左右．从180株芽孢杆菌中 筛选到一株产水解圈大且对6种病原真菌有明显抑制作用的侧孢芽孢杆菌 (占ac讲螂陆地ms阳Hf，，简称B1)1．864菌株。 检测硫酸铵分级沉淀所得粗蛋白以及几丁质酶抑制剂处理后的粗蛋白 的几丁质酶酶活和抑真菌效果，初步判断1．864菌株抑真菌活性物质为几丁 质酶。 B11．864几丁质酶的产生不依赖诱导物的存在。在添加诱导物和无诱导 物存在条件下，均能在培养物上清中检测到高低相近的酶活力。说明1．864 6．O。100℃加热1onlin。 菌株组成型表达几丁质酶。其最适温度60℃，最适pH 活力下降60％；pH4．O～10．O范围内酶活力稳定。‰4对酶活力有较明显的激 活作用，FeW酶活力稍稍有抑制作用。 环柱法对B11．864菌株几丁质酶粗蛋白进行抑真菌实验。结果证明几丁 质酶租蛋白对8种真菌都有明显抑制作用。 将B11．864菌株几丁质酶粗蛋白与Btl5A3可湿性粉魏混合对甜菜夜蛾 151．4隅^乩。证明Bn．864菌株几丁质酶对Bt制刹的杀虫效果起到了协同作 用。 B11．864菌株几丁质酶粗蛋白对库蚊幼虫有致死作用，粗蛋白终酶活为 8nlU／fnL，16 和97．5％。 关键字；芽孢杆菌几丁质酶几丁质酶基因抑真菌活性协同作用 Abs协n Abstract 0f horder chitin粼in metllod to唧lo“the把soufcesBacinusaqI“i臼畦ve 5“Baciu璐蛐．hwasf0岫d也atalls昀ins w鹤usedtoinvestigale coIlld鲫Ⅳ ina colloidalcMtinasa c孤b锄sourceand40