ELISA的及质量管理酶标仪的校准.docxVIP

概述●ELISA是一种敏感性高、特异性强、重复性好的实验诊断方法，由于其试剂稳定、易保存、操作简便、结果判断较客观等因素，以及既适宜于大规模筛查试验又可以用于少量标本的检测，既可以做定性试验也可以做定量分析等优点，已广泛应用于微生物学、寄生虫学、肿瘤学和细胞因子等领域。ELISA的影响因素较多，加强质量管理才能充分发挥其方法学的优点。分析前质控●人员培训实验是人操作的，因此检验人员需经过培训，熟练掌握本专业如下几方面的技术知识：◎检验项目的基本原理（ELISA原理）；◎临床意义；◎熟悉检测技巧，了解易出差错的环节及难点；◎熟悉检测试剂性能（包括试剂盒组成，包被片段及其组成）；◎熟悉检测仪器的原理及性能；掌握数据处理的能力和质量控制知识。◎某些特殊项目的检测如抗HIV等需经有关部门组织的专门培训班，考试合格后持证上岗。分析前质控◎ELISA原理：1971年Engvall等人把免疫组化的EIA技术应用于临床检验发展为ELISA技术。特点：在固相表面组装免疫活性物质形成免疫吸附剂酶标记免疫活性物质，进行信号放大；有二步温育反应二次洗涤过程；灵敏度特异性相对较高。局限性：只能检测到ng水平精密度差（批内CV15-20%）；线性范围窄（一个数量级）；存在HD-HOOK效应。ELISA原理●根据检测目的和操作步骤不同有三种基本方法。●双抗体（原）夹心法检测抗原（体）的常见方法，应用针对抗原两个不同决定族的两种单抗分别作为固相载体和酶标抗体检测溶液中的抗原（适用于二价以上抗原,不能测小分子半抗原）。●间接法检测抗体的方法，利用酶标记的抗抗体（第二抗体）检测已与固相抗原结合的抗体。●竞争法检测抗原或小分子半抗原、抗体，以测抗原为例，使待测抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合，结果如待测抗原含量越多，与固相抗体结合的酶标抗原就越少，显色越浅，二者呈负相关。ELISA原理今后的发展方向●聚苯乙烯表面的高级制备。已有的技术是酰肼化（聚二氟乙叉，PVDF）；生物素化；预包被多聚赖氨酸等，均是专利产品。●酶促信号放大的改变，如酶促荧光、酶促化学发光等。ELISA临床意义●各型肝炎的特征及标志物乙肝二对半的模式及临床意义HBsAg HBeAg HBcAb-IgG HBcAg-IgM HBeAb HBsAb 临床意义+　　　　+　　　　- 　　　　 -　　　　-　　　　-　　　　急性HBV感染早期HBV复制活跃+　　　　+　　　　+　　　　　+　　　　-　　　　-　　　　急慢性HBV感染，HBV复制活跃+　　　　-　　　　+　　　　　+　　　　-　　　　-　　　　急慢性HBV感染，HBV复制中跃+　　　　-　　　　+　　　　　+　　　　+　　　　-　　　　急慢性HBV感染，HBV复制低跃+　　　　-　　　　+　　　　　-　　　　+　　　　-　　　　HBV复制停止或极低-　　　　-　　　　+　　　　　+　　　　-　　　　-　　　　平静的HBV携带状态，HbsAg-　　　　-　　　　+　　　　　-　　　　-　　　　-　　　　HBV既往感染，未产生抗-HBs-　　　　-　　　　+　　　　　+　　　　+　　　　-　　　　抗HBs出现前期，HBV复制低-　　　　-　　　　+　　　　 -　　　　+　　　　+　　　　HBV感染恢复期-　　　　-　　　　+　　　　 -　　　　-　　　　+　　　　HBV感染恢复期+　　　　+　　　　+　　　　　+　　　　-　　　　+　　　　不同亚型ＨＢＶ再感染+　　　　-　　　　-　　　　-　　　　-　　　　-　　　　ＨＢＶ－ＤＮＡ整合-　　　　-　　　　-　　　　-　　　　-　　　　＋　　　病后或接种疫苗后获得免疫　试剂盒选择◎卫生部规定乙肝试剂，丙肝试剂，艾滋病试剂，梅毒试剂及血型试剂必须使用经卫生部生物制品检定所检定合格，并贴有防伪标签的产品，试剂应从灵敏度，特异性，精密度，稳定性，简便性，安全性及经济性作出全面的评价。◎灵敏度：有二层含义，1）为试剂检出被检物质的最低量的能力；2）为试剂对人群或大量样品中阳性检出的能力（假阴性越少越好），取决于包被物的全面性。◎特异性：指试剂正确检定不存在的被检物质的能力（无假阳性），取决于包被抗原（体）及标记抗原（体）的纯度及特异性。◎精密度：ELISA试剂一般指其批内CV，其值应小于15%；定量试剂应同时考察线性范围试剂盒选择◎稳定性：试剂在规定条件下能储存的时间，一般采用破坏性试验即将试剂存放于37℃保存，定期测定其灵敏度，特异性和精密度等指标，直到其质量指标开始下降为止，通常认为37℃每稳定一天相当于4-10℃保存一个半月。◎简便性：指在不影响试剂的前三项指标的前题下，实验和测定步骤越少越好，在定性试验中结果判断简单明了，）定量试验结果计算也应简单。◎安全性：指试剂对操作者和环境安全无害传染性。