耐高温耐高酸柠檬酸菌种驯化及筛选.doc

耐高温耐高酸柠檬酸菌种驯化及筛选【摘要】：选取发酵良好的出发菌株，通过高温和高酸驯化及筛选，得到2株耐37℃高温、耐高酸30%、发酵性能优于原柠檬酸菌种Co827黑曲霉。 【关键词】：柠檬酸黑曲霉；耐高温高酸菌株；筛选 【 abstract 】 : the fermentation of good start strains, through the high temperature and high acid domestication and screening, get two strains 37 ℃ high temperature resistance, resistance to high acid 30% better performance than the original citric acid, fermentation Co827 aspergillus species. 【 keywords 】 : citric acid aspergillus; High temperature resistant strains of the high acid; screening 中图分类号：Q946.81+8.6文献标识码：A 文章编号： 前言：柠檬酸是一种用途广泛对环境没有任何破坏作用的无色晶体，在食品和饮料工业中作为调味剂、保鲜剂、防腐剂、抗氧化剂、增稠剂。为了提高菌种在高酸环境下酶的活性，需要对菌种进行耐高酸驯化。柠檬酸深层通风发酵工艺在夏季高温季节，要控温在30℃-33℃，需采取一系列降温措施，为减少降温带来的麻烦和费用，采用耐高温柠檬酸发酵是行之有效的措施之一。 以黑曲霉Co827为出发菌种，从37℃高温发酵液中分离菌种，经酸性驯化优筛得到2株耐高温高酸、产酸高、转化率高的优良菌株。 1材料与方法 1.1材料 1.1.1样品 高温发酵液分离出的菌株 1.1.2培养基 富集驯化培养基：80BX-150BX麦芽汁100ml，pH值自然，0.1MPa灭菌25min-30min; 分离培养基：50BX-80BX麦芽汁100ml，琼脂2g，30%柠檬酸，0.1MPa，灭菌25min-30min，制成平板备用； 摇瓶培养基：按参考文献[2]方法配制。 麸曲培养基：按参考文献[2]方法，选取麦麸皮，水洗后装入500ml三角瓶中，灭菌30min-45min。 1.2方法 1.2.1测定方法 总糖和还原糖测定：按文献[3]的方法进行。 柠檬酸的酸度测定及转化率计算[3]：柠檬酸的酸度测定是取发酵滤液11ml，酚酞为指示剂，0.1429mol/L NaOH滴定，所消耗NaOH的毫升数即为酸度产酸率。 柠檬酸转化率＝（总酸／总糖）×100% 1.2.2试验流程 样品采集→富集驯化→平板初筛→斜面纯化→摇瓶复筛→麸曲孢子→摇瓶优筛→获得耐高温、耐高酸、产酸高的柠檬酸菌株 1.2.3柠檬酸菌种的耐高温耐高酸驯化 取分离样品1ml,接种于富集驯化培养基中，在37℃、350r/min摇床上培养48h，再取培养液1ml进行传代驯化，每56h接种传代一次。经过若干次高温驯化后，选择生长代谢旺盛、菌丝球密而小、分布均匀者供平板分离初筛。 1.2.5平板分离初筛 取高温驯化后的柠檬酸菌液在高酸（含柠檬酸30%）平板上划线，37℃培养80-100h，挑选生长优良的单菌落接种于斜面试管中。 1.2.6摇瓶复筛 将初筛得到的菌株分别接种于摇瓶培养基中进行摇瓶发酵。以原菌种对照，每株一瓶，总糖0.13Kg/Kg，在37℃、350r/min摇床上培养72h（还原糖小于0.5%），淘汰产酸较低的菌株，将产酸较高的菌株接种于麸曲扩大培养基中，35℃培养制成麸曲孢子。 1.2.7摇瓶复筛 将复筛得到的麸曲孢子分别接于摇瓶培养基中，以原菌种为对照（CK），每株5瓶，总糖0.14kg/kg，在37℃、350r/min摇床上培养80h，测酸度，计算转化率。 2结果与分析 2.1初筛与复筛结果 经过高温驯化、酸性平板分离后进行初筛，共选出35株接种于斜面上，再经复筛，得到耐高温、高酸且产酸率均高于对照（CK）的8株柠檬酸菌株进行试验，结果见表1 2.2优筛结果 T1、T10、T12、T16菌株的麸曲孢子在35℃高温培养条件下长势优于对照菌株；在37℃高温发酵80h产酸及转化率均高于对照菌株。但T1和T10的转化率更接近于理论转化率106%（表2），所以T1和T10为所选的优良菌株。 3结论 筛选出的耐高温高酸柠檬酸菌株T1和T