2．简述目的基因的获得、运载体的构建.ppt

活动2 体验基因文库的构建过程 活动2 体验基因文库的构建过程 活动3 体验基因表达载体的构建过程 * * 基因工程的基本操作程序 有同学知道这三种标志吗? 非转基因产品认证 绿色食品 质量安全 1．简述基因工程基本操作的四个步骤; 2．简述目的基因的获得、运载体的构建、目的基因的导入与检测等常用的方法及其基本原理. 考点列举 基因工程的基本操作程序 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 活动1 结合基因操作的四个基本过程,你能说出下列历史事件，为什么对基因工程的诞生起到了决定性的作用？ 科学家首次培育出世界第一个转基因植物转基因烟草。 1983 科学家首次培育出世界第一个转基因动物转基因小鼠。 1980 F. Sanger、A. Maxam和W. Gilbert发明了DNA快速测序技术（1986 Nobel生理或医学奖）。 1975 斯坦福大学的S. Cohen小组将含有卡那霉素抗性基因的大肠杆菌R6-5质粒与含有四环素抗性基因的另一种大肠杆菌质粒pSC101连接成重组质粒，具有双重抗药性。 1973 Paul Berg小组完成了首次体外重组实验（1980年Nobel化学奖）。 1972 H.O. Smith等分离出第一种限制性核酸内切酶（1978年Nobel生理或医学奖） 1970 Crick又提出了遗传信息传递的“中心法则”（1968年Nobel生理或医学奖）。 1957 James D. Watson和Francis H. C. Crick揭示了DNA分子的双螺旋结构和半保留复制机制（1962年Nobel生理或医学奖）。 1953 Alfred Hershy和Marsha Chase证明T2噬菌体的遗传物质是DNA。 1952 Avery等证明DNA是遗传物质。 1944 PCR技术问世（1988年发现TaqDNA聚合酶）（1993年Nobel化学奖）。 1983 重大事件 年份 理论基础 技术支持 合成基因 组织、器官、细胞 基因组DNA cDNA文库 基因文库 目的基因的克隆 基因工程的基本操作程序 第一步： 目的基因的获取 如何建立? 分析基因文库构建过程的图解，思考问题： 什么意思？怎么做？ 温和噬菌体：感染宿主细菌后不引起细菌裂解而与宿主细胞建立共生关系并随细菌繁殖传给细菌后代。 解读cDNA文库的构建过程 (1)提取某种生物发育某一时期的mRNA; (2)mRNA反转录形成DNA片段; (3)DNA片段与载体连接后,储存在一个受体菌的群体中。 分析基因文库构建过程的图解，思考问题： 就是基因表达载体？ （08年江苏高考）将动物致病菌的抗原基因导入马铃薯制成植物疫苗，饲喂转基因马铃薯可使动物获得免疫力。以下是与植物疫苗制备过程相关的图和表。 注意基因克隆载体与基因表达载体的区别 载体(vector）： 用于承载、克隆、转移目的基因(DNA片段)，能自我复制的DNA分子。 （1）在基因克隆时：将目的片段转移到宿主细胞中进行复制克隆——克隆载体； （2）在基因导入受体时：将目的片段转移到受体细胞中使目的片段稳定存在并表达——表达载体。 目的基因 启动子和终止子 复制原点 标记基因 多种单一限制酶切点 合适大小 DNA片段 复制原点 标记基因 多种单一限制酶切点 合适大小 目的基因转移 转化或感染 合成基因 组织、器官、细胞 基因组DNA cDNA文库 基因文库 目的基因的克隆 基因工程的基本操作程序 第二步： 基因表达载体构建 下图是天然土壤农杆菌Ti质粒结构示意图（示部分基因及部分限制性内切酶作用位点），思考回答： √ × √ √ × √ √ √