实验二报告高效液相色谱仪的使用和不易挥发有机化合物的定性分析.doc

华南师范大学实验报告 学生姓名： 学号 ：专业：化学师范 年级、班级：09级化四 课程名称：近代有机分析方法和实验实验 时间：2011年10月12日 高效液相色谱仪的使用和不易挥发有机化合物分析 实验目的： 学习使用高效液相色谱仪 通过对样品的定性测定，初步掌握获得高效液相色谱图和数据的一般操作程序与技术 实验原理： 高效液相色谱分是由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部份组成。由于样品溶液中的各组分在色谱柱中两相中的分配系数不同，当试样随流动相进入色谱柱后，组分就在两相间进行反复多次的分配，由于固定相对各种组分的吸附能力不同，各组分在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定柱长后彼此分离，依次从色谱柱流出，通过检测器时样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。 实验仪器与试剂： 仪器：岛津液相色谱仪，SPD-20A检测器，LC-20AT泵，微量进样器，C18色谱柱 试剂：烟酸乙酯，甲醇（AR,色谱纯），超纯水 实验步骤：准备准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤1.4检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。接通电源，依次开启不间断电源、B泵、A泵、检测器，待泵和检测器自检结束后，打开打印机、电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站）。波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按[func]键[Enter]键，用数字键输入所需波长值，按[Enter]键确认。按[CE]键退出到初始屏幕。 , w4流速设定：在A泵显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需的流速（柱在线时流速一般不超过1ml/min），按[Enter]键确认。按[CE]键退出。流动相比例设定：在A泵显示初始屏幕时，按[conc]键，用数字键输入流动相B的浓度百分数，按[Enter]键确认。按[CE]键退出。 更换流动相并排气泡将A/B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；逆时针转动A/B泵的排液阀180°，打开排液阀；按A/B泵的[purge]键，pump指示灯亮，泵大约以9.9ml/min的流速冲洗，3min（可设定）后自动停止；将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中，设流速为5ml/min，按[pump]键，冲洗3min后再按[pump]键停泵，重新接上柱并将流速重设为规定值。 平衡系统按《N2000色谱数据工作站操作规程》打开在线色谱工作站软件，输入实验信息并设定各项方法参数后，按下数据收集页的 [查看基线] 按钮。等度洗脱方式 ; g5 J; Q按A泵的[pump]键，A、B泵将同时启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。按A泵的[pump]键，A、B泵将同时启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按4.6操作。观察基线变化。如果冲洗至基线漂移0.01mV/min，噪声为0.001mV时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。进样）进样前按检测器[zero]键调零，按软件中 [零点校正] 按钮校正基线零点，再按一下 [查看基线] 按钮使其弹起。用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取。 烟酸乙酯的液相色谱图 峰号 组份名 保留时间 面积 峰高 1 烟酸乙酯 4.303 7079570.8 528894.3 六、结果分析及讨论 定性分析：在液相色谱分析中，当实验条件设置在合适位置并保持不变的时候，在样品能保证检测的前提下，对实验结果影响最大的就是实验过程中实验者的操作是否标准及规范。一般说来，整个实验过程中进样操作应由同一人进行，以防个体操作差异而引起实验数据出现误差。本实验运用液相色谱法对烟酸乙酯进行定性分析，其中流动相是选用甲醇与水的8:2混合液，在该液相色谱实验中，甲醇无（强）吸收峰，利于样品的检测。在样品进样后4.303min处出现一强吸收峰，利用保留时间能方便快捷判断出样品，该峰属于烟酸乙酯。 七、思考题 1、液相色谱法和气相色谱法有何区别？ 答：高效液相色谱分析法(HPLC)，它的基本概念及理论基础（如保留值、塔板理论、速率理论、容量因子、分离度等），与气相色谱是