微波辅助提取-高效液相色谱法测定蔬果中的Vc含量.docVIP

微波辅助提取-高效液相色谱法测定蔬果中Vc含量王颖*, 万彬,刘晓东,万惜春 中山大学化学与化工学院, 广州，510275 * E-mail: wy_firework@yahoo.cn 摘要 本实验采用微波辅助萃取法快速萃取水果中的Vc，用1mol/L乙酸萃取苹果、葡萄和桔子中的Vc，以3%的乙腈-0.05mol/L KH2PO4水溶液作为流动相，高效液相色谱进行分析，维生素C的浓度在0—100mg/L范围内与色谱峰面积A呈正比关系。结果表明，苹果、葡萄、桔子中的维生素C含量分别为23.96mg/L；利用高效液相色谱法测定蔬果中的维生素C的含量，具有试剂用量少、操作简单、结果准确等特点。 关键词 微波辅助提取 高效液相色谱 维生素C 苹果 引言 维生素C，又称抗坏血酸（AH2)。医学研究发现它不但具有生理活性，而且在人体内能阻止亚硝胺的形成，具有一定的防癌作用[1]。但人体自身不能合成维生素C，必须由食物中摄取，所以分析测定水果和蔬菜中的V含量，将对鉴别水果和蔬菜的营养价值具有重要意义[2]。本实验选取的测定对象柚子与猕猴桃都属于日常消费量较大的大众水果，其中被称为“奇异果”的猕猴桃更有“之王”的美兴誉。 利用微波辅助技术作样品前处理国内外已有不少文献报道。微波辅助技术处理样品的最突出特点是反应速度极快,节时和节能,产率高,而且环境友好。其中微波辅助提取萃取()是利用微波与介质的离子和偶极子分子的相互作用，具有可缩短提取时间、节省试剂、减少污染、提高萃取率等优势,在环境、食品、制药等领域中得到了广泛的应用]。 LC-20A（岛津香港有限公司）；微波萃取仪（上海新仪微波化学科技有限公司）；色谱柱：Phenomenex C18柱 (250 mm×4.6 mm, I.D.5 μm)；平头进样器。 实验试剂 乙腈（色谱纯），冰乙酸，维生素C，磷酸二氢钾等均为分析纯；蔬果样品。实验用水为超纯水。 Vc标准溶液：快速准确称取0.025g Vc，用1 mol/L乙酸溶液溶解，定量转移至250ml容量瓶中，用1 mol/L乙酸溶液定容，得到100mg/L标准溶液备用。 色谱条件：流动相：3%的乙腈-0.05 mol/L KH2PO4水溶液（v/v）；流速1 mL/min；柱温为室温，紫外检测波长265 nm；进样量10 μL。 实验步骤 参数设定：按操作说明开启液相色谱仪，设定方法参数。 样品准备：准确称取切碎的苹果、葡萄、桔子各5.0g，抽滤后分别以一定量1 mol/L乙酸为萃取溶剂萃取汁液。微波功率自动调节，萃取时间为10 min，萃取温度设定为50℃，平行萃取两次。萃取液过滤后用1 mol/L乙酸溶液定容至50mL，制成供试品溶液。 校准曲线绘制：分别配制5，20，50，80，100 mg/的Vc样品溶液，待液相色谱稳定后进样分析，平行测定三次。以Vc色谱峰面积对浓度作图，绘制校准曲线。 定量分析：供试品溶液经0.45 μm微孔滤膜过滤后进行HPLC分析。平行测定两次，记录其Vc的色谱峰面积，根据校准曲线计算蔬果样品中Vc的含量，结果以mg/100 表示。结果与讨论 3.1标准曲线的绘制及色谱图表1 各标液及样品的保留时间和峰面积 样 品 保留时间/min 峰面积/10V·s 5 mg/L标液 264228 20 mg/L标液 2.772 804738 50 mg/L标液 2.810 1992723 80 mg/L标液 2.789 3152295 100 mg/L标液 2.817 3877902 苹果 5.0265 2.784 1814 葡萄 5.0045 2.894 2495 桔子 5.0380 2.836 443834 图1 标样的工作曲线 图2 苹果样品溶液色谱图 图3 葡萄样品溶液色谱图 图4 桔子样品溶液色谱图 3.2 结果分析 保留时间定性，谱峰面积定量。 由表1中的标准溶液色谱数据绘制工作曲线（图1），曲线线性拟合的相关系数为0.9998，其中Vc峰的确定是通过各标准曲线谱图中峰面积是否随浓度梯度变化来确定的。 定性分析：图2-4分别为100 mg/L的苹果样品、葡萄样品、桔子的色谱图，由图中可见，以上三种样品的色谱图中主峰保留时间分别为2.784 min、2.894 min和2.836 min，与标准品的Vc保留时间较为接近，可由此确定两样品中的标示峰即为Vc色谱峰。 定量分析：将三个样品的Vc峰面积1814、2495、443834 mV·s)，代入工作曲线方程中得出桔子溶液中Vc浓度为9.93