毛细管电泳技术及应用y.docVIP

毛细管电泳技术及应用 （生物化学与分子生物学专业） 摘要：本文对毛细管电泳技术及其在氨基酸分析检测、多肽分析检测及药物检测中的应用作了综述。 关键词：毛细管电泳；氨基酸；多肽；药物 Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｔｈｅ ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ, ｓｅｐａｒａｔｉｎｇ ｍｏｄｅ ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｔｅｃ-ｈｎｏｌｏ ｇｙ ｏｆ ｃａｐｉｌｌａｒｙ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｓｅｄ. Ａ ｒｅｖｉｅｗ ｗａｓ ｍａｄｅ ｏｎ ｔｈｅ ｒｅｃｅｎｔ ａｄｖａｎｃｅ ｓ ｏｆ ｃａｐｉｌｌａｒｙ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｉｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ amino acid、ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ 、proteins and medicines ,ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｔｈｅ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ, ｐｕｒｉｔｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ, ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌａｎａｌｙｓｉｓ, ｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃ ｐｏｉｎｔｄ ｅｔｅｒ- ｍｉｎａｔｉｏｎ ａｎｄ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ. Ｋｅｙｗｏｒｄｓ: Ｃａｐｉｌｌａｒｙ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ; amino acid;Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ; proteins ; medicine ｅｐａｒａｔｉｏｎ;Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ 毛细管电泳(Capillary Electrophoresis,ＣＥ)是Neuhoff等人于1973年建立的毛细管均一浓度和梯度浓度凝胶用来分析微量蛋白质的方法，是一类以毛细管为分离通道,以高压直流电场为主要驱动力的液相分离技术。相比传统电泳和高效液相色谱(ＨＰＬＣ),它具有高效、快速、高灵敏度、高度自动化等特点,并且所需样品量和溶剂消耗少、运行成本低、对环境污染小,在一台ＣＥ仪器上可兼容多种分离模式,因此适用样品范围广,已被广泛应用于生物、化学、医药、食品、环保等领域。 近年来，随着科学技术的不断发展，各种分析检测技术也得到长足发展，基于毛细管电泳技术的各种分析检测方法发展迅速。应用领域不断拓宽，毛细管电泳技术已成为生物医学研究中最具吸引力的工具之一。本文简要介绍了毛细管电泳技术的基本原理、特点、分类及其在氨基酸、多肽、蛋白质、药物等方面的应用。 1 毛细管电泳技术 1.1基本原理 毛细管电泳是一类以毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力的新型液相分离技术。基本机构包括进样系统、毛细管、检测系统、高压电源、清洗系统、温控系统等。它是以高压电场为驱动力,以毛细管为分离通道,依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的一类液相分离技术。在高电压作用下,带电粒子在毛细管内电解质溶液中迁移,迁移速度等于电泳和电渗流(ＥＯＦ)的矢量和。中性粒子的电泳速度为零,其迁移速度相当于ＥＯＦ的速度。各种粒子因迁移速度的不同而实现分离。 1.2　分离模式 毛细管电泳具有多种分离模式,给样品分离提供了不同的选择方式,这对于复杂样品的分离分析是非常重要的。毛细管电泳的可分为以下类型：见表1。 1.3　检测技术 由于毛细管电泳溶质区带体积小,对于检测器的灵敏度要求很高,所以通常采用柱上检测。用于毛细管电泳的检测器有紫外、荧光、电化学、质谱、拉曼光谱检测器等。目前已商品化的用于毛细管的检测器有紫外、荧光和质谱检测器。不同检测方法的特点，如表2所示。 1.4毛细管电泳技术的优点 较其它分离方法,毛细管电泳有如下优点：高效,效率为105～106板/ｍ；快速,几十秒至十几分钟就可完成分离；微量,进样所需体积可小到1μｌ,消耗体积在1～50ｎｌ之间；可通过选用不同的分离模式来适用不同的分离对象；经济,操作费用低；洁净,通常使用水溶液,对环境无害；自动化程度较高等。 2 毛细管电泳技术的应用 2.1氨基酸的分析检测 蛋白质氨基酸是重要的生物组分,检测其在生物、组织、细胞、蛋白质和多肽以及相关制品中的含量与结构对于我们了解其组成和代谢途径,发掘其营养价值,指导临床诊断和医药开发有着十分重要的意义。ＣＥ是通过调整缓冲液或流动相,加入添加剂,涂层或填充毛细管等,对带电粒子和中性粒子进行分离。 对于多种氨基酸混合物,由于其包括一系列酸性、碱性和中性组分,以阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(ＳＤＳ)形成胶束的ＭＥＣＣ模式可以有效地对氨基酸进行分离。Ｏｔｓｕｋａ等比较了加入ＳＤＳ和阳离子表面活性剂十二烷基三甲基溴化铵(ＤＴＡＢ)分离22种衍生氨基酸的效果,发现添加ＳＤＳ对氨基酸的分辨率优于添加ＤＴＡＢ,而在迁移时间上要长于后者。在ＳＤＳ胶束溶液中加入乙腈、尿素、β-ＣＤ、甲醇、四氢呋喃等可以改善分