雷公藤内酯醇的细胞内定位研究.pdfVIP

3556 重庆医学 2015年 9月第 44卷第25期 · 技术与方法 · doi：10．3969／j．issn．1671—8348．2015．25．034 雷公藤 内酯醇的细胞 内定位研究 张 颖，肖 沙，徐 伟 ，刁庆春 ，郝 进△ (重庆市第一人 民医院／重庆市中医院皮肤科 ，重庆 400011) [摘要] 目的 检测雷公藤 内酯醇的细胞 内定位，探讨其在细胞内的作用位点。方法 采用4-溴甲基一7一甲氧基香豆素标记 雷公藤 内酯醇，与人肝癌细胞孵育；并与细胞核染料 PI或细胞质膜染料 DiI行双色荧光染色，用荧光显微镜观察 。结果 与对照 相 比，香豆素标记在紫外激发下呈特异性的淡蓝色荧光；与DiI共定位显示，香豆素标记在细胞质 (膜)存在；与PI共定位显示，香 豆素标记在细胞核存在 ，且荧光强于细胞质 (膜)。结论 雷公藤 内酯醇在细胞 内主要位于细胞核，其次是细胞质(膜)，提示雷公 藤 内酯醇可能主要在细胞核 内起作用 ，其次是在细胞质(膜)上起作用 。 [关键词] 雷公藤 ；香豆素；细胞定位 [中图分类号] R93 [文献标识码] A [文章编号1 1671—8348(2015)25—3556—02 In ‘celllocalization oftriptolide ZhangYing，XiaoSha，Xu吼 ，DiaoQingchun，HaoJin (DepartmentofDermatology，ChongqingFirstPeople。sHospit。t，Ch0ngqing TraditionalChineseM edicineHospital，Chongqing 400011，China) ． [Abstract] Objective ToclarifythecellularlocalizationoftriptolideandtOexploreitsin—cellactionsites．Methods 4-(Bro— momethy1)一7一methoxycoumarinwasemployedtOlabeltriptolide，thenlabelledtriptolidewasincubatedwithhumanhepatomacarci— nomacells．Subsequently，incubatedcellsweresubjectedtOstainwithfluorescentdyeDiIorPI，whichwerespecifictOcytoplasmic membranesystem andnucleus，respectively．Results Comparedwiththenon—triptolidecontrol，coumarinlabelledtriptolideshowna lightbluefluorescenceunderUV excitation；Co—localizationwithDiIshowedthattriptolideexistincytoplasm and(or)oncellmem— brahe；Co-localizationwithPIshowed thattriptolide1ocatedincel1nucleus．Moreover，microscopicobservationindicated thatthe fluorescenceintensityinnucleuswasdenserthanthatincytoplasm．Conclusion Thepresntstudydemonstratethattriptolidemain— lyactinnucleus，followedbyactingincytoplasm and(or)oncellmer~brane． [Keywords] triptolide；coumarin；cellularlocaliza