Klotho蛋白在高血压发病中的作用.doc

　　Klotho蛋白在高血压发病中的作用 【关键词】 Klotho蛋白;一氧化氮;老年;高血压 ABSTRACT: Objective To investigate the role of klotho protein in the pathogenesis of hypertension. Methods ples of 104 patients itted to our hospital bet ethods. Results Klotho protein absorbance and NO ay be involved in the pathogenesis of hypertension through nitric oxide mechanism. 　　KEY mHg(1mmHg=0.133kPa)。表1 两组一般情况比较 　　1.2 方法 收取所有患者血液3～5mL后于2000r/min离心10min，吸取上清液于-80℃冰箱保存待测。①Klotho蛋白的检测：采用ELISA法。将患者血清按1∶10稀释后加入96孔板中，每孔0.1mL，4℃过夜。次日弃去孔内液体，用含有吐温20 PBS洗涤液清洗5次，加入英国ab公司提供的抗klotho抗体(ab76356)，klotho抗体用含牛血清白蛋白PBS稀释，稀释比例1/12500，稀释后加入96孔板中，每孔0.1mL置入37℃温箱孵育1h，后弃去液体，用含有吐温20的PBS洗涤液清洗5次，加入辣根酶标记的山羊抗兔抗体，用含牛血清白蛋白PBS稀释，稀释比例1/2000，稀释后加入96孔板中，每孔0.1mL置入37℃温箱孵育1h，后弃去液体，用含有吐温20的PBS洗涤液清洗5次，加入新鲜配制成的TBM显色剂每孔0.1mL置入37℃温箱孵育30min，终止液终止反应，于美国产酶标仪(型号550)中测读。所有值至少重复检测2次。 ②NO的测定：用硝基还原酶法。采用南方建成生物有限公司提供的试剂盒，步骤严格按照说明书进行，检测使用韩国产Scinco紫外可见光分光光度计(型号SUV2120)， 计算 按说明书提供的计算公式计算结果。 　　1.3 统计学处理 所有数据均输入计算机，计量资料以均数±标准差(±s)表示，用SPSS17.0/PC软件包进行统计分析。两组间均数采用t检验，多组间均数采用F检验，指标间关系采用直线相关性分析。Plt;0.05为有统计学差异。 　 　2 结 果 　　2.1 年龄与klotho蛋白之间的关系 将年龄与klotho蛋白吸光度进行相关性检验，结果显示klotho吸光度随年龄增加而降低，两者存在负相关性(r=-0.316，P=0.043，图1)。 　　2.2 两组血清klotho蛋白的吸光度及NO水平 高血压组klotho蛋白吸光度为0.360±0.130，血清NO水平为(42.59±19.83)μmol/L，均低于非高血压组0.499±0.220及(65.81±22.75)μmol/L，两组间比较均有统计学差异(Plt;0.01，表2)。表2 高血压组与非高血压组血清klotho蛋白的吸光度与NO水平 　　2.3 klotho蛋白的吸光度与血清NO水平的相关性 将所有标本的klotho蛋白的吸光度与NO进行相关性检验,结果显示klotho吸光度随着血清NO水平的升高而增加，两者存在正相关性(r=0.223，P=0.018，图2)。 　　 3 讨 论 　　Klotho基因是近年来发现的一种新型抗衰老基因。定位于染色体13q12区域[56]，其分泌性蛋白大约549氨基酸[7]。Klotho基因敲除后小鼠过早出现和人类衰老相关的多种行为和病理生理改变，如寿命缩短、运动失调、性功能障碍、痴呆、白内障、动脉粥样硬化、肺气肿、骨质疏松、免疫功能降低等[811]。本研究对klotho蛋白与检测对象年龄之间的相关性分析发现，klotho蛋白随年龄的增长而下降(图1)，经统计学分析，两者间存在负相关性(r=-0.316，P=0.043)，说明klotho与衰老有关。 　　另有研究发现，腺病毒介导的klotho基因导入动脉粥样硬化模型鼠(OLETF)内(伴有高血压、肥胖、高血糖、高血脂)可以改善血管内皮功能障碍，增加NO的生产，降低血压升高，防止内膜肥厚和血管纤维化[12]。本研究观察了klotho蛋白的变化情况，发现在高血压与非高血压人群之间klotho蛋白均存在明显差异，高血压人群klotho蛋白均低于非高血压人群(Plt;0.01)，说明klotho蛋白在高血压的发病过程中起非常重要的作用。研究发现，NO作为内源性血管舒张因子的主要成分，能抑制血管壁及循环血中的一些活性因子，从而抑制血管平滑肌细胞增生，防止内皮损伤及动脉硬化形成[13]。晨阳等[