他克莫司与环孢菌素A对肝移植受者CD4-CD8 T淋巴细胞亚群及共刺激分子的调节作用.doc

　　他克莫司与环孢菌素A对肝移植受者CD4/CD8 T淋巴细胞亚群及共刺激分子的调节作用 ：白杨娟, 王兰兰, 蔡 蓓, 邹远高, 冯伟华, 严律南 【摘要】 目的: 探讨他克莫司（Tacrolimus, FK506）与环孢菌素A（CsA）对肝移植受者T淋巴细胞亚群共刺激分子的调节作用。方法: 采用荧光标记单克隆抗体(mAb)结合流式细胞技术, 测定移植术后使用FK506或CsA 治疗 2月末的肝移植受者外周血T细胞亚群及其表面共刺激分子CD28、 CD152 和ICOS的表达情况。以健康志愿者（健康对照组）和患终末期肝脏疾病拟进行肝移植者（疾病对照组）为对照。结果: 疾病对照组T细胞亚群平衡紊乱、 共刺激分子表达异常（Plt;0.05）。治疗组肝移植受者T淋巴细胞亚群表达恢复至健康对照水平, T细胞表面CD28和ICOS分子表达显著降低（Plt;0.05）而CD152分子表达明显升高（Plt;0.05）。比较不同药物治疗组: CsA治疗组CD4+T细胞表达和CD8+T细胞表面CD28、 CD152分子表达均明显高于FK506治疗组（Plt;0.05）; 其他指标无统计学意义（Pgt;0.05）。结论: 在常规血药浓度条件下FK506和CsA的对CD4/CD8T细胞亚群及共刺激分子的免疫调节作用存在差异。FK506对T细胞亚群的调节作用强于CsA。FK506可同时抑制正性共刺激分子CD28和ICOS表达并促进负性共刺激分子CD152表达, 而CsA对T细胞免疫抑制作用主要是通过促进CD152分子的高表达介导。 【关键词】 他克莫司; 环孢菌素A; CD28; CD152; ICOS; 肝移植 他克莫司（Tacrolimus, FK506）与环孢菌素A（Cyclosporine A, CsA）是目前国内外器官移植术后临床应用最为普遍的免疫抑制剂。它们同属钙调磷酸酶抑制剂（Calcineurine inhibitor, I）类药物, 主要通过抑制T细胞活化相关细胞因子基因的转录激活及相应细胞因子的表达发挥免疫抑制作用。T细胞活化相关细胞因子的表达作为免疫细胞信号传导的末期事件必然受到上游信号的影响, 而共刺激信号分子在T细胞活化和功能效应调节中扮演了重要角色, T细胞发生免疫活化或免疫耐受直接受这些信号分子的调控。尽管FK506与CsA同属钙调磷酸酶抑制剂类药物, 但他们在免疫调节效应、 用药剂量和毒性作用等方面却具有各自的特点。因此, 我们拟通过分析FK506和CsA对肝移植术后患者外周血T细胞亚群及其各亚群细胞表面共刺激分子CD28、 CD152（CTLA4）和ICOS的调节作用, 探讨FK506与CsA对CD4/CD8T淋巴细胞亚群共刺激分子表达的影响。 1 对象和方法 1.1 研究对象 (1)接受I治疗的肝移植受者（肝移植受者组）, 为2004-07/2004-12在四川大学华西 医院 肝移植中心接受同种异体肝移植的受者, 30例, 男性, 28～62岁, 其中20例接受FK506抗排斥方案治疗（FK506+激素+硫唑嘌啉或骁悉）, 10例接受CsA抗排斥方案治疗（CsA+激素+硫唑嘌啉或骁悉）。根据使用的I不同, 进一步分为FK506治疗组和CsA治疗组。于肝移植术后接受免疫抑制治疗2月末采集外周血标本进行各指标测定。(2)终末期肝脏疾病患者（疾病对照组）, 为拟接受肝移植的终末期肝脏疾病患者, 20例, 男性, 年龄29～60岁, 其中肝癌13例, 肝硬化4例, 重症肝炎3例。所有患者均未使用FK506、 CsA或其他相关免疫调节药物。(3)健康对照: 均为健康志愿者, 20例, 男性, 20～50岁, 无相关疾病史, 均未使用过FK506、 CsA或其他相关免疫调节药物。 1.2 方法 1.2.1 标本采集和处理 采集EDTA抗凝外周全血标本。留取部分全血用于FK506和CsA血药浓度检测后, 剩余标本于采集后2 h内以Ficoll淋巴细胞分离液制备单个核细胞后标记检测。 1.2.2 FK506血药谷浓度测定 在ABBOTT IMX（ABBOTT公司, 美国）分析仪上使用TacrolimusⅡ试剂盒（ABBOTT公司, 美国）以荧光偏振免疫原理测定FK506血药谷浓度。 1.2.3 CsA血药谷浓度测定 应用高效液相色谱法（HPLC）测定CsA血药谷浓度。 1.2.4 T细胞亚群和共刺激分子表达测定 相应荧光标记单克隆抗体(mAb)20 μL与单个核细胞悬液或全血100 μL进行30 min避光标记反应, 溶血后使用EPICSXL型流式细胞仪（BECKMAN COULTER公司, 美国）测定各项指标。所用的荧光标记mAb为: CD4FITC/CD8PE/CD3PECY5、