内皮型一氧化氮合酶基因多态性与宁夏地区缺血性脑血管病的相关性分析.doc

　　内皮型一氧化氮合酶基因多态性与宁夏地区缺血性脑血管病的相关性分析 【摘要】 ：目的 研究内皮型一氧化氮合酶（eNOS）基因多态性与宁夏地区人群缺血性脑血管病之间的关系。方法 应用聚合酶链反应(PCR)法对宁夏地区596例健康对照者、468例缺血性脑血管病患者的eNOS基因第4内含子可变重复序列多态性(VNTR）进行基因型分析。结果 两组人群eNOS基因第4内含子ＶＮＴＲ表现为eNOS4a/4a，eNOS4a/4b，eNOS4b/4b 3种基因型。在缺血性脑卒中患者中aa基因型频率为2.7%，ab基因型频率为18.7%，bb基因型频率为78.6%;对照组中aa基因型频率为1.2%，ab基因型频率为13.6%，bb基因型频率为85.2%。a等位基因频率在患者组和对照组分别为12.1%和8.0%，经χ2检验，二组间基因型频率a等位基因频率分布差异有统计学意义(χ2=9.122，P=0.010； χ2=10.008，P=0.002)。结论 eNOS4a基因携带与宁夏地区人群缺血性脑血管病的发生有关联性。 【关键词】 内皮型一氧化氮合酶；基因多态性；缺血性脑血管病 　　Abstract：Objective To investigate the relation betorphism and cerebral ischemic stroke patients of Ningxia. Methods A case-control study ed to determine ber of tandem repeats(VNTR) polymorphism of eNOS gene ic stroke. The VNTR polymorphism of eNOS gene ic stroke group and 596 healthy subjects group from Ningxia population， Results Involved in this study， VNTR4 of eNOS gene shoed eNOS4a， eNOS4b and eNOS4a/4b. The frequencies of the three geypes ic stroke of Ningxia population. 　　Key orphism; cerebrovascular disease 　　越来越多的研究表明［1-2］，遗传因素在缺血性脑卒中的发生、 发展 中起着重要作用，这些基因的缺陷可能是缺血性卒中的危险因素，探讨其遗传背景，对预防和 治疗 缺血性脑血管病有重要意义。目前已知一氧化氮合酶有三个亚型，分别是神经元型NOS（nNOS）、内皮型NOS（eNOS）和诱导型NOS（iNOS），其中由eNOS基因编码所产生的NO是一种自由基性质的气体，具有强烈的舒张血管、松弛血管平滑肌和抑制内皮细胞增殖及特异的神经系统病理生理作用［3］，是最具生物活性的eNOS。该基因第4内含子具有27个碱基数目的可变重复序列多态性(VNTR），根据重复次数不同表现为eNOS4a/4a、eNOS4b/4b、eNOS4a/4b 3种基因型，研究显示a等位基因较b等位基因具有更重要的病理意义［4］。本研究旨在探讨和进一步证实eNOS基因多态性与宁夏地区缺血性脑血管病的相关性。 　 　1 资料与方法 　　1.1 研究对象 　　本研究共纳入缺血性脑血管病患者共468例，其中血栓性脑梗死404例，腔隙性脑梗死33例，短暂性脑缺血发作 21例; 男338例，女130例，平均年龄59.43岁。病例组来自宁夏医科大学附属 医院 神经内科2007年1月至2008年7月缺血性脑血管病住院患者，经详细神经系统检查及CT、MRI证实，诊断符合1995年中华医学会第4届脑血管会议修订的缺血性脑血管病诊断标准，并除外栓塞、低血容量、感染、肿瘤等所致的脑梗死。对照组596例，选择同期在宁夏医科大学附属医院门诊和体检中心进行常规健康体检的人群，其中男489例，女107例，平均年龄43.96岁。 　　1.2 主要试剂和仪器 　　Promega公司全血DNA提取试剂盒；北京天根生物工程公司提供预混式PCR反应体系试剂，标准分子量 marker，上、下游引物并进行PCR反应产物测序。引物设计为：上游：5’－ＡＧＧＣＣＣＴＡＴＧＧＴＡＧＴＧＣＣＴＴＴ－3’，下游：5’—ＴＣＴＣＴＴＡＧＴＧＣＴＧＴＧＧＴＣＡＣ－3’。高速离心机、PCR仪、琼脂糖凝胶电泳仪、紫外光成像设备等均由宁夏医科大学中心实验室提供。 　　 1.3 方法 　　1.3.1 DNA提取与纯化 　　所有研究对象均抽取清晨空腹外周静脉血3mL，EDTA抗凝后储存于-80℃冰箱备用。严格按照promega