存活素siRNA表达质粒对化疗药物抑癌作用的影响.doc

　　存活素siRNA表达质粒对化疗药物抑癌作用的影响 ：李莉萍 ，罗超权，张志珍，梁念慈 【摘要】 目的 探讨存活素siRNA表达质粒(mU6/survivin质粒)对化疗药物抑癌作用的影响。方法 采用MTT法检测mU6/survivin质粒与多种常规肿瘤化疗药物对乳腺癌MCF7细胞增殖的联合作用。结果 比较单纯化疗药物作用组的各相应浓度点，siRNA表达质粒mU6/survivin与化疗药物顺铂、环磷酰胺、5氟尿嘧啶或秋水仙碱合用组对肿瘤细胞MCF7的细胞增殖抑制率均明显提高，差异均有统计学意义(Plt;0.01);对靶向DNA药物如顺铂、环磷酰胺和5氟尿嘧啶的抗癌性能具有显著的协同增强作用(二者合用效应Q值均gt;1)，但对靶向微管的药物秋水仙碱没有相加作用(Q值lt;1)。结论 在解除肿瘤细胞中存活素功能的基础上进行药物化疗，可能是肿瘤 治疗 的一个新的可行方向。 【关键词】 存活素;siRNA;质粒;化疗药物 Abstract: Objective To study the influence of survivin siRNA expression plasmid on antitumor role of chemotherapeutic drugs. Methods The bined role of mU6/survivin plasmid and several chemotherapeutic drugs in the proliferation of MCF7 cells ined by MTT method. Results The bined use of mU6/survivin plasmid and cisplatin, cyclophosphamide, 5fluorouracil or colchicine resulted in significant inhibition of MCF7 cells pared U6/survivin plasmid or chemotherapeutic drugs (Plt;0.01). The synergistic effect U6/survivin and cisplatin, cyclophosphamide and 5fluorouracil (Qgt;1) other than colchicine (Qlt;1). Conclusion The bination of chemotherapy and survivin deprival may be a novel regimen for cancer patients. 　　Key id; chemotherapeutic drug 　　肿瘤手术切除结合化学药物的细胞毒性治疗仍然是当今肿瘤治疗的主要手段，顺铂、环磷酰胺、5氟尿嘧啶(5Fu)和秋水仙碱都是广泛应用于临床实践的常规肿瘤化疗药物，但其药效并不总是理想，肿瘤治疗后伴随而来的耐药或多药耐药性(MDR)更是治疗过程中难以克服的障碍。存活素特异性地表达于肿瘤细胞中，临床数据显示，存活素表达高低与肿瘤患者的存活率相关[1]。我们针对存活素基因设计和克隆的mU6/ Survivin siRNA表达质粒[2]，能高效地剔降乳腺癌MCF7细胞中的存活素mRNA以及蛋白质的表达。本实验运用该质粒剔降乳腺癌细胞MCF7中存活素的表达，之后施以化学毒性药物进行治疗，观察顺铂、环磷酰胺、5Fu和秋水仙碱在存活素被沉默之后的抗癌效果。 　　 1 材料和方法 　　1.1 试剂 　　空载体mU6pro由美国Michigan大学Dave Turner博士惠赠; ProFection 哺乳类转染系统购自Promega公司; 5Fu(≥99%)、环磷酰胺(≥99%)、秋水仙碱(99.6%)购自南京学子医化研发中心;顺铂注射液(1 mg/mL)由江苏豪森药业股份有限公司生产;乳腺癌细胞MCF7为本科室保存。 　　1.2 细胞培养和转染 　　MCF7细胞生长于含15 %小牛血清、0.5 U/mL胰岛素、100 U/mL青霉素、100 μg/mL链霉素的RPMI1640完全培养基中，置37℃，5% CO2饱和湿度孵箱内孵育。细胞转染采用磷酸钙法，操作按ProFection哺乳类转染系统(Promega)试剂盒说明书进行。pEGFPN1和mU6/survivin质粒以1∶3的比例共转染MCF7细胞，在60 mm培养皿上转染3 μg mU6/survivin质粒, 荧光显微镜检测细胞表达绿色荧光蛋白EGFP的效率来确定转染效率均超过80%，空载体mU6pro转染细胞作为空白对照。 　　1.3 肿瘤化疗药物