抑癌基因P53和癌基因MDM2在肾透明细胞癌中的表达及意义.doc

　　抑癌基因P53和癌基因MDM2在肾透明细胞癌中的表达及意义 【关键词】 P53；MDM2；肾肿瘤；免疫组织化学 【Abstract】 Objective To investigate the expression of antioncogene P53 and cancer gene MDM2 proteins and their significance in the pathogenesis and progress of renal clear cell carcinoma.Methods To detect the expression of P53 and MDM2 in 60 cases of renal clear cell carcinoma and 10 cases of normal kidney tissues munohistochemical method.Results The positive rate of P53 in the tissues of the 60 cases of renal clear cell carcinoma is 41.66% (25/60), much higher than 10% (2/20) al kidney tissues. There is statistical significance in the disparity (P＜0.05). Furthermore, the positive rate of MDM2 in the tissues of the 60 cases of renal clear cell carcinoma is 53.33% (32/60), higher than 0% (0/20) al kidney tissues. Similarly, there is statistical significance of the disparity (P＜0.05).Therefore, P53 and MDM2 are positively correlated to a great extent(χ２=2.9,P＝0.09).Conclusion Both P53 and MDM2 participate in the pathogenesis and progress of renal clear cell carcinoma and they can be considered as the biological index to evaluate renal clear cell carcinoma. 【Key s,immunohistochemistry 肾透明细胞癌是人类泌尿系统常见的恶性肿瘤之一,且发病率呈增高趋势。P53是研究最多的抑癌基因,野生型P53基因(以上的正常肾组织,术后标本经10％福尔马林固定、石蜡包埋。P53、MDM2鼠抗人单克隆抗体，免疫组化EliVision试剂盒、DAB显色试剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限公司。 1.2 方法 常规石蜡包埋切片，制成5 μm厚连续切片，黏附于APES处理过的载玻片上，75℃烤片1 h，脱蜡，水化，蒸馏水浸泡冲洗，免疫组织化学染色：①高温高压抗原修复；②用PBS液冲洗（5 min×3次），3%H2O2室温下孵育10 min（以清除过氧化物酶的活性），用PBS液冲洗（2 min×3次）；③5%～10%正常山羊血清封闭，室温下孵育10 min；④除去血清，分别滴加P53、MDM2一抗工作液，4℃冰箱过夜，PBS液冲洗（5 min×3次）；⑤滴加生物素标记的二抗，37℃孵育30 min，PBS液冲洗（5 min×3次）；⑥滴加SABC复合物，37℃ 30 min，PBS冲洗，（5 min×3次）；⑦滴加DAB底物，孵育10 min左右显色；⑧流水冲洗，苏木素复染，盐酸酒精分化，氨水返蓝。逐级酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。用已知阳性标本作阳性对照；以PBS液代替一抗作阴性对照。 1.3 结果判定 肿瘤细胞核染成棕黄色或棕褐色，胞浆染成浅黄色或棕黄色为阳性反应，染色结果参照文献［3］评分方法，以每张切片在400倍镜下均观察整体染色情况，选择5个有代表性的区域，每个区域计算200个细胞。阳性细胞数计分：阳性数＜5%为0；阳性数＞5%，但≤35%为1；阳性数＞35%，但≤70%为2；阳性数＞70%为3。着色强度计分：不着色为0，弱着色（呈淡棕黄色）为1，强着色（呈明显的棕黄色)为2。阳性分级：以上两项相加，0～1分为（－），2分为（±），3分为（+），4分为（++），5分为（+++）：+～+++计为阳性，－～±计为阴性。 1.4 统