放射联合Sorafenib对肝癌细胞的不同时效作用.doc

　　放射联合Sorafenib对肝癌细胞的不同时效作用 ：李巧巧， 刘孟忠， 王莉， 李锦清 【摘要】 【目的】 在人肝癌细胞中观察放射联合Sorafenib对细胞生长的作用，并探讨其作用途径。【方法】 选择人肝癌SMMC-7721和BEL-7402细胞株，分为单纯放射组(IR)、放射前30 min联合Sorafenib组(IR + S-pre)和放射24 h后联合Sorafenib组(IR + S-post)。细胞克隆形成实验检测照射后细胞克隆形成率，绘制细胞存活曲线并 计算 放射增敏比;细胞增殖抑制实验检测6 Gy照射后第1、2、3、4、5、6 d细胞增殖情况;免疫荧光染色观察照射后DNA损伤阳性细胞比例;流式细胞仪检测放射后细胞凋亡比例。【结果】 细胞克隆形成实验结果显示，IR + S-pre放射后细胞克隆形成增加，放射增敏比在SMMC-7721和BEL-7402细胞中分别为0.78和0.88;而IR + S-post放射后细胞克隆形成减少，放射增敏比在SMMC-7721和BEL-7402细胞中分别为1.43和1.23。细胞增殖抑制实验显示IR + S-pre与IR放射后细胞增殖抑制率相似，而IR + S-post放射后细胞增殖抑制率明显提高。 Sorafenib在SMMC-7721与BEL-7402中均有诱导细胞凋亡作用。IR + S-pre在放射后24 h细胞凋亡比例明显增高[IR vs IR + S-pre： (6.1 ± 1.0)% vs (18.3 ± 2.0)% (SMMC-7721)， (8.2 ± 2.1)% vs (17.0 ± 2.4)%(BEL-7402)，P lt; 0.001]。IR + S-post在放射后48 h细胞凋亡比例明显增高，[IR vs IR + S-post分为(6.9 ± 2.0)% vs (15.9 ± 1.8)%(SMCC-7721)， (8.0 ± 1.5)% vs (14.2 ± 2.5)% (BEL-7402)，P lt; 0.05]。放射后30 min，IR + S-pre与IR的DNA受损阳性细胞比例无明显差异。放射后6 h IR + S-pre的DNA受损阳性细胞残留比例明显下降[IR vs IR + S-pre： (59.9 ± 2.4)% vs (23.8 ± 2.9)%(SMMC-7721)，(46.4 ± 3.8)% vs (25.0 ± 3.0)%(BEL-7402)，P lt; 0.001]。【结论】 放射联合Sorafenib对肝癌细胞作用具有明显时效性，放射24 h后联合Sorafenib增加放射引起的细胞克隆性生长抑制和增殖抑制，而放射前30 min联合Sorafenib 作用相反。 【关键词】 肝癌; 放射; 索拉非尼; 凋亡; DNA损伤修复 　Abstract： 【Objective】 The effect of radiation bined a cells (HCC) and the mechanism of bination in pre-irradiaiton (IR + S-pre group) and radiation or cells age after irradiation ined respectively through γ-H2AX focus by immunoflurescence. The apoptosis cells ined by floetry. 【Result 】 The HCC cells had more colonies and similar proliferation inhibitor by IR + S-pre， and less colonies and higher proliferation inhibitor by IR + S-post pared L/L新生牛血清的RPMI1640完全培养液(内含100 u/mL青霉素和100 μg/mL链霉素)，置于37 ℃、体积分数5%CO2、湿度85%恒温培养箱培养，取指数生长期细胞进行实验。 　　1.2 实验材料 　　Sorafenib购自Bayer公司，DMSO溶解后以常规培养液稀释。终浓度为15 μmol/L的Sorafenib中，DMSO质量浓度为0.06%(下同)。 　　1.3 实验分组 　　对照组(Control)，单纯加入0.06% DMSO作用24 h;单纯放射组(IR)，除给予放射外，其处理与对照组相同;放射前30 min联合组(IR + S-pre)，放射前30 min加入终浓度15 μmol/L Sorafenib，作用24 h;放射24 h后联合组(IR + S-post)，放射24 h后加入15