曲克芦丁与牛血清白蛋白相互作用的光谱研究.doc

　　曲克芦丁与牛血清白蛋白相互作用的光谱研究 ：孙荣梅， 于丽燕， 陈昌云 【摘要】 目的： 应用光谱技术研究曲克芦丁(troxerutin, TRO)与牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA) 间结合作用机制。方法： 通过荧光光谱法确定曲克芦丁对BSA的荧光猝灭机制。依据热力学参数讨论两者之间的主要作用力类型。利用同步荧光光谱考察曲克芦丁对BSA构象的影响。结果： 曲克芦丁对BSA的荧光猝灭机制为静态猝灭;反应的热力学参数ΔH=-77.06 KJ/mol，ΔS=-152.20 J/(mol·K)。结论： 曲克芦丁与BSA之间的主要作用力是范德华力;曲克芦丁的加入使BSA构象发生了变化。 【关键词】 牛血清白蛋白; 曲克芦丁; 荧光猝灭; 同步荧光光谱 　　[Abstract] Objective: Applied spectroscopy to study the interaction mechanism of troxerutin and bovine serum albumin(BSA).Methods： Fluorescence spectroscopy method ine the fluorescence quenching mechanism of BSA caused by troxerutin.According to the thermodynamic parameters the major force types bet albumin etry.Results： The quenching mechanism of troxerutin to bovine serum albumin odynamic parameters of the reaction ol，ΔS=-152.20 J/(mol·K).Conclusion： The main binding force bet albumin could change the serum protein conformation. 　　[Key albumin; troxerutin; fluorescence quenching;synchronous fluorescence spectroscopy 　　曲克芦丁(troxerutin,TRO)系芦丁经羟乙基化制成的半成品黄酮化合物。具有抑制红细胞和血小板凝结，防止血栓形成的作用;同时能增加血中氧的含量，改善微循环，促进新生血管形成以增进侧支循环的开放[1]。结构见图1。血清白蛋白是血浆中含量最丰富的载体蛋白，它能和许多内源性物质广泛结合。各种药物进入人体一般都要通过血浆的贮存和运输，而后才能到达受体部位并发生药理作用。 　　研究药物与血清白蛋白的相互作用具有重要的理论意义[2]。蛋白质的功能与其结构密切相关，研究中药有效成分对蛋白质结构的影响，不仅能为确定中草药有效成分及作用强度提供一定信息，而且对全面阐明小分子化合物与蛋白质的结合机制也有重要意义，同时也有利于了解中药的作用机制。本文研究了TRO与牛血清白蛋白(bovine serum albumin，BSA)的作用机制以及温度对结合常数的影响。分析了TRO与BSA的结合模式，从分子水平认识该反应的作用机制。 　　图1 曲克芦丁的结构 　　Fig 1 The structure of troxerutin 　 　1 材料与方法 　　1.1 仪器和试剂 　　TU1901PC型分光光度计(北京普析通用仪器有限公司)，LS50B型荧光分光光度计(美国PerkinElmer公司)，PHS25型PH计(上海雷磁仪器厂);TRO( 中国 药品生物制品检定所),牛血清白蛋白(Sigma公司);三羟甲基氨基甲烷(Tris)、盐酸、氯化钠等试剂均为分析纯;实验用水为二次蒸馏水。 　　1.2 溶液配制 　　用0.9%NaCl配成pH=7.4的TrisHCl缓冲液来配制浓度为1.0×10-3 mol/L的TRO储备液备用;以TrisHCl缓冲溶液(pH=7.4，含0.1 mol/L NaCl 以维持溶液的离子强度)为溶剂配制1.0×10-4 mol/L 的BSA储备液备用。 　　1.3 实验方法 　　荧光光谱的测定：取3 ml 1.0×10-6 mol/L的BSA溶液于1 cm的石英比色皿中，用微量注射器逐次加入浓度为1.626×10-3 mol/L的TRO溶液进行滴定，加样体积由实验点浓度 计算 确定(滴定剂累加体积小于100 μl)。以278 nm为激发波长，绘制300～500 nm波长范围的荧光光谱;同步荧光光谱实验中同时扫描激发和发射单色器，固定激发和发射波长差分别为60 nm和20 nm，其他同荧光光