松茸多糖对辐射损伤小鼠免疫功能的保护作用.doc

　　松茸多糖对辐射损伤小鼠免疫功能的保护作用 ：王宏芳，李雪静，浦昀，李金华，徐坤，宋秀玲，李娟 【摘要】 目的 探讨松茸多糖(PTM)对辐射损伤小鼠免疫功能的保护作用。方法 90只健康雄性ICR小鼠随机分为正常对照组(NC)、照射对照组(IC)和PTM组，每组30只。PTM组小鼠给予1200mg/kg剂量PTM灌胃，每天1次，连续7d;第8天给予IC组和PTM组动物全身一次性照射，总剂量2.0Gy。检测小鼠照射后第1、5、14天的脾指数、脾细胞对ConA诱导的增殖反应、巨噬细胞吞噬功能和抗体生成能力。结果 与IC组比较，PTM组小鼠的脾指数、脾细胞对ConA的增殖反应、巨噬细胞吞噬功能和抗体生成能力均明显增强(Plt;0.01)，且照射后第14天PTM组小鼠脾指数、脾细胞对ConA的增殖反应能力、巨噬细胞吞噬率和抗体生成能力与NC组比较差异无统计学意义(Pgt;0.05)。结论 松茸多糖对辐射所致的小鼠免疫功能损伤有明显的保护作用。 【关键词】 松茸多糖;X射线;免疫功能;脾指数;巨噬细胞 松茸(tricholoma matsutake)是一种纯天然的食用菌类，被誉为“菌中之王”，主要分布在日本、朝鲜半岛以及我国东北和西南地区。松茸菌肉肥厚，有香气，味道鲜美，而且富含蛋白质、脂肪和多种氨基酸，具有很高的营养价值[1]。此外，松茸具有强身、益肠胃、止痛、理气化痰、驱虫等功效。 现代 科学 研究表明，松茸具有抗癌、抗炎等特殊作用[23]。松茸多糖(polysaccharides of tricholoma matsutake, PTM)是从天然真菌植物松茸中分离得到的一种植物多糖。关于松茸提取物质的免疫增强作用、抗肿瘤活性及 治疗 支气管炎等功能已有 文献 报道[45]，而对于松茸多糖辐射防护作用的研究较少，主要源自本课题组的实验研究[67]。本研究通过观察松茸多糖对辐射损伤小鼠免疫功能的影响，探讨其辐射防护作用，为进一步研究提供实验依据。 　 　1 材料与方法 　　1.1 受试物 松茸多糖(PTM)是从盛产于吉林省长白山区天然真菌-松茸中提取的多糖类化合物。由本课题组采用索氏提取法提取，制备溶液时以生理盐水溶解。 　　1.2 实验动物、分组及处理 健康雄性ICR小鼠，体重(20±2)g，6～8周龄，由吉林大学基础医学院动物中心提供。小鼠按体重随机分为正常对照组(NC)、辐射照射组(IC)和PTM给药组(PTM)3组，每组30只。NC组和IC组给予生理盐水灌胃;PTM组给予剂量为1200mg/kg体重的PTM灌胃，每天1次，连续7d。第8天除NC组外，均接受X线照射。分别于照射后第1、5、14天，每组处死10只动物，进行相关指标的检测。 　　1.3 主要实验仪器 STT法。小鼠脾细胞浓度调成1×107个/mL，ConA浓度为10μg/mL，加于96孔平底培养板，37℃、50mL/L CO2培养箱中培养48h，终止培养前4h每孔加入10μL MTT，培养结束后，吸出上清，每孔加入二甲亚枫100μL，570nm酶标仪测定A值。 　　1.4.3 巨噬细胞吞噬功能的测定 小鼠腹腔注射100g/L淀粉悬着液1mL，24h后腹腔注射20mL/L鸡红细胞1mL，30min断头处死，腹腔注射0.2mL肝素注射液，吸腹腔液于玻片上展开，湿盒中37℃温育30min，瑞士-姬姆萨染色5min，PBS冲洗， 自然 干燥，显微镜下观察，计算巨噬细胞吞噬率和吞噬指数。 　　吞噬百分率(%)=200个巨噬细胞中吞噬CRBC的巨噬细胞数200个巨噬细胞数×100% 　　吞噬指数=200个巨噬细胞吞噬CRBC总数200个巨噬细胞数×100% 　　1.4.4 B淋巴细胞功能的测定 采用玻片小室法。小鼠腹腔注射50mL/L SRBC悬液0.2mL，4d后脱臼处死，取出脾脏，用磷酸缓冲生理盐水制成单细胞悬液，调细胞浓度为1×107个/mL，冰浴中保存备用;取0.24mL脾细胞悬液、0.24mL 200mL/L SRBC悬液和0.92mL新鲜的豚鼠稀释血清混匀，取混合液0.1mL加入到玻片小室中，平行样2份，小室两端用石蜡封口后，置37℃温箱中孵育1h，取出后显微镜下计数小室中形成的空斑数。结果换算：结果用106个脾细胞形成的PFC数表示。 　　1.5 统计学处理 采用SPSS 15.0软件进行统计分析。实验数据用±s表示，实验组与对照组间数据比较采用单因素方差分析。以Plt;0.05为差异有统计学意义。 　 　2 结 果 　　2.1 小鼠脾脏指数 小鼠受到2.0Gy射线照射后，第1、5、14天小鼠脾指数明显低于同期NC组(Plt;0.01);PTM组脾指数在照射后第1、5、14天明显高于同期IC组(Plt;0.01)，且第14 天 PTM组脾