磁柱分选技术在CMV特异性CD8+T细胞纯化中的应用研究.doc

　　磁柱分选技术在CMV特异性CD8+T细胞纯化中的应用研究 ：王新超, 张伟, 邸旭, 姜智 陈宝安 【摘要】 目的：探索联合磁选技术和巨细胞病毒(CMV)连锁状多聚体磁珠纯化CMV特异性CD8+T细胞，从而用于CMV疾病的过继性免疫 治疗 。方法：运用CMV连锁状多聚体MHC磁珠标记CMV特异性CD8+T细胞，然后用MS磁柱分选，从HLAA2/CMV血清阳性健康志愿者的外周血标本中纯化CMV特异性CD8+T细胞。为了优化分选效果，分别将标记后的标本进行1次和两次MS磁柱分选，比较纯化后的CMV特异性CD8+T细胞的纯度。结果：通过MS磁柱分选，CMV特异性CD8+T细胞的最高纯度达到90.45%。经过1次和两次MS磁柱分选后，CMV特异性CD8+T细胞的纯度有显著差异，但经过两次磁柱分选较1次分选的细胞丢失严重。结论：联合磁柱分选技术和CMV连锁状多聚体磁珠纯化CMV特异性CD8+T细胞效果良好，有利于对CMV疾病的过继性免疫治疗。 【关键词】 MS磁柱; 连锁状多聚体; 巨细胞病毒; 获得性免疫治疗; T细胞 　　[Abstract] Objective: To investigate n and the plex of cytomegalovirus(CMV) streptamer MHCmagic beads could offer the advantage of the purification of CMVspecific CD8+T cells, therefore benefit for the adoptive immunotherapy of CMV disease. Methods: CMVspecific CD8+T cells agic column from the peripheral blood of HLAA2/CMV seropositive healthy donors by using the plex of CMV streptamer MHCmagic beads labeling. For best results, n betns selection and one column selection. Results: After positive selection by MS column, a purity es of MS column selection, but the loss of CMVspecific CD8+T cells ns selection. Conclusion: It is concluded that the technology of MS column and the plex of CMV streptamer MHCmagic beads could be used to purify CMVspecific CD8+T cells for adoptive immunotherapy. 　　[Key n; streptamer; cytomegalovirus; adoptive immunotherapy; T cells 　　巨细胞病毒(cytomegalovirus, CMV)疾病是同种异体外周血干细胞移植后常见并发症和导致死亡的主要原因[1]。CMV特异性CD8+T细胞是阻止或限制CMV反应的关键因素[2]，其过继性免疫治疗已经用于CMV疾病的治疗。获得高纯度的CMV特异性CD8+T细胞是过继性免疫治疗的关键。虽然CMV特异性CD8+T细胞体外培养或克隆技术能够有效获得高纯度的CMV特异性CD8+T细胞[3-4]，但由于对技术和费用的要求较高而难以推广。Cobbold等[5]应用四聚体技术纯化CMV特异性CD8+T细胞，虽然取得了较满意的结果，但四聚体试剂随细胞输注入体内可产生毒副作用。本实验探索可否运用磁柱技术联合连锁状多聚体既简便又高效地纯化CMV特异性CD8+T细胞，进而用于CMV疾病的过继性免疫治疗。 　　 1 材料和方法 　　1.1 主要试剂和设备 　　连锁状多聚体试剂(包括IS缓冲液、连锁状多聚体磁珠、DBiotin、CMV连锁状多聚体PE和MHC等)由德国IBA公司提供，抗CD8*PerCP抗体由美国BD公司提供，分别储存于4 ℃、-20 ℃和-80 ℃冰箱。FicollBiocoll和RPMI 1640分离液由德国生物化学AG公司提供;人AB白蛋白由德国DRK公司提供;DPBS、青霉素和链霉素由美国Invitrogen公司提供;BD FACS冲洗液、清理液、浸润液为德国BD公司产品;MACS滤片和MS磁柱为德国Miltenyi Biotec公司产品。 　　1.2 血标