HIVgp120包膜糖蛋白与CD4受体和一个中和抗体的复合物.docVIP

HIV gp120包膜糖蛋白与CD4受体和一个中和抗体的复合物的结构摘要：HIV进入靶细胞需要病毒外膜糖蛋白gp120与细胞表面的CD4糖蛋白和趋化因子受体的序列之间的相互作用。这些作用将导致病毒病毒包膜和靶细胞膜之间的融合。尽管gp120能诱导病毒中和抗体的产生，但HIV能逃避免疫反应。我们在2.5?的分辨率下分析了HIV-1 gp120核心与CD4受体的两个结构域片段和能阻断趋化因子受体的结合的中和抗体的与抗原结合片段的复合物的X-射线结构。这个结构显示出gp120与CD4结合面上的洞状结构，一个保守的趋化因子受体结合位点，CD4结合后的构象变化的迹象，CD4i抗原表位的特征，和免疫逃避的具体机制。我们的结果为理解HIV进入靶细胞的复杂的生物学特性提供了一个框架，并且可能为干预HIV进入靶细胞提供指导。HIV-1、HIV-1和与其相关病毒SIV，能导致机体的CD4+细胞的减少，进而导致AIDS疾病的进展。HIV进入靶细胞时有病毒包膜糖蛋白介导的，包膜糖蛋白组合成寡聚体，尤其是三聚体，表达在病毒表面。这些病毒包膜糖蛋白被HIV跨膜糖蛋白gp41固定在病毒包膜上。病毒刺突的表面主要由外膜糖蛋白gp120组成，gp120与CD4三聚体复合物的每一个亚基之间形成非共价键。比较不同的灵长类免疫缺陷病毒的序列发现有5个相似的可变区（V1~V5）。前4个可变区形成暴露于表面的环状结构，并在环基底部有分子内二硫键。保守的gp120区域形成了对于gp120与CD4膜外区和细胞表面上病毒受体之间的相互作用非常重要的不连续的结构。HIVgp120的保守区和可变区均被广泛地糖基化。gp120表面的变异性和糖基化可能会调节gp120糖蛋白的抗原性和免疫原性，同时在自然感染过程中，gp120是作为中和抗体的主要靶点。灵长类免疫缺陷病毒进入靶细胞包括gp120与HIV首要受体CD4的结合。gp120主要与有4个免疫球蛋白结构域样的CD4的N-末端结合。CD4的N-末端的两个结构域和整个胞外的部分结构均被测验了，并且基因突变显示CD4上的抗体CDR2有同样功能的结构是gp120与CD4的关键。对于gp120与CD4结合十分重要的保守位点同样地用基因突变分析了。CD4的结合可诱导gp120的构象发生变化，包括特定的趋化因子受体结合位点的暴露（或形成）。这些趋化因子受体，对于HIV-1主要是CCR5和CXCR4，作为病毒进入细胞的第二受体。gp120 V3环是特异性的主要决定因子。然而，因为CD4的结合而暴露的一些其它保守位点同样也参与gp120与CD4的结合过程。这种CD4的结合后的暴露被认为能增强多种gp120抗体的就结合，比如能有效阻断gp120-CD4复合物与趋化受体结合的V3环抗体。这些抗体被称为CD4i抗体。CD4的结合可能引起包膜糖蛋白其它的构象改变。比如，某些HIV-1变异株的包膜糖蛋白与CD4的结合会导致gp120从复合体中释放出来，但这步对于HIV进入靶细胞的作用还未明确。HIV和相关的逆转录病毒属于一组包膜融合病毒，包括冠状病毒、正粘病毒、副正粘病毒，这些病毒都需要转录后切割才能获得活性。这跨膜蛋白（相当于gp41）具有序列相似性，尤其是N-末端融合肽，他们直接参与病毒包膜的融合过程。gp41的胞外区像流感病毒血凝素HA2一样形成螺旋卷曲，这支持这组病毒可能有相同的病毒侵染机制的特征。在其它方面，包膜病毒之间存在差异。他们使用不同的侵染方式（HIV直接穿过，而流感病毒通过细胞毒作用），并且尽管十分相近的病毒已有独自的受体。外膜蛋白（相当于gp120）相应地具有特异性。因此，在HIV-1与鼠白血病病毒（另外一种逆转录病毒）之间没有检测到序列和结构的相似性。受体介导的融合激活的机制也可能具有病毒特异性。由于gp120在受体结合和雨中和抗体相互作用的过程中起到了重要作用，因此gp120的结构信息对于理解HIV感染机制和设计治疗性和预防性措施有着重要作用。这些我们报导了在2.5?的分辨率下，部分去糖基化的HIV-1 gp120核心与细胞表面CD4受体的两个结构域片段和作用于CD4i抗原表位的中和抗体17b的抗原结合片段结合晶体结构。随同的信件是联系这个结构与gp120的抗原特征。结构测定因为HIV gp120广泛的糖基化和构象多样性，我们设计了一种结晶策略以蛋白表面完全修饰为目的。我们截断了来自不同病毒株的gp120的末端和环状结构，广泛地去除gp120的糖基化，并且生产出与不同配体结合的复合物。理论上分析提示表面多态性的减少和多种变异株试验能极大地提高晶体形成的可能性。拍摄了将近20个gp120变异体及其配体的复合物后，我们获得了有gp120、CD4的N-末端结构域（D1D2）和人单克隆中和抗体17b的Fab组成的三聚体复合物的结晶。用以结晶