P13K／AKT抑制剂对肾透明细胞癌中Notchl信号通路的影响.pdfVIP

广东医学 2013年 1月 第34卷第 1期 GuangdongMedicalJournal Jan．2013，Vo1．34，No．1 · 5l · PI3K／AKT抑制剂对 肾透明细胞癌 中Notchl 信号通路的影响 刘尚文 ，黄庆波 ，艾青 ，朱鸣阳 ，张旭 中国人民解放军第三O三医院泌尿外科 (南宁530021)； 中国人民解放军总医院泌尿外科 (北京 100853) 【摘要】 目的 探讨PI3K／AKT信号通路在肾透明细胞癌中的活性及其抑制剂对Notchl信号通路的影响。 方法 收集36例肾透明细胞癌及其邻近非肿瘤 肾组织，Westernblot检测AKT(P一$473)和 Notchl蛋 白表达，分 析AKT(P—S473)的表达与肿瘤临床特征之 间的关系。PI3K／AKT抑制剂 LY294002处理 肾透 明细胞癌细胞系 786一O，Westernblot和 qrt—PCR检测HES1、Notchl蛋 白及mRNA的变化，MTS法检测细胞增殖，流式细胞术检测 其对细胞周期及凋亡的影响。结果 肾透明细胞癌组织中AKT(P一$473)的表达明显高于癌旁组织，其表达与患 者年龄、肿瘤大小、核分级及肿瘤TNM分期无明显关系(P0．05)。PI3K／AKT抑制剂LY294002抑制786—0细 胞增殖，促进细胞周期抑制，诱导细胞凋亡。抑制 PI3K／AKT信号通路可降低 HES1与Notchl蛋白表达。结论 在肾透明细胞癌 中，PI3K／AKT信号通路呈过度活化状态，并且与Notchl信号通路共同起促癌作用。PI3K抑制剂 LY294002可以下调Notchl信号通路的活性 ，为肾透明细胞癌的治疗提供 了新的治疗策略。 【关键词】 肾透明细胞癌；PI3K／AKT信号通路 ；Notchl信号 在导致患者死亡的恶性肿瘤中，肾细胞癌排名前 DMEM培养基(Gibco，USA)培养细胞 ，培养箱条件：37~C、 10位。目前对肾细胞癌治疗手段的有限性，迫切需要 5％CO。H3K抑制剂 LY294032购 自美国SantaCruz生 研究新的治疗方法。PI3K／AKT信号通路的激活对细 物公司，以DMSO稀释药物，工作浓度50Ixmol／L。细胞 胞功能有重要影响，包括细胞增殖、死亡、细胞黏附功 处理24h后提取总RNA，处理48h提取总蛋白。等量 能及肿瘤形成。研究 证实在肿瘤细胞中，PI3K／AKT DMSO为阴性对照。 信号通路呈过度活化状态，包括卵巢癌、前列腺癌和肺 1．2 方法 癌，其在肿瘤发生中起促进作用。Notch信号通路参与 1．2．1 qrt—PCR检测mRNA RNA提取试剂盒 (艾 多种组织细胞的生长、分化及凋亡调节，并在细胞的分 德莱生物公司，北京)提取细胞总 RNA，一步法逆转为 化方向上发挥重要作用。Notchl信号通路在哺乳动物 cDNA。SYBRGreen做荧光定量 PCR，△Ct法分析数 。肾脏发育中有重要作用 ，在小鼠肾脏发育过程中，抑制 据，肽基脯氨酰异构酶A(PPIA)为内参，有文献 报道 Notchl信号通路可以导致上皮间隔组织增加和肾小球 PPIA的mRNA在 肾组织中表达稳定 ，适合作为rt— 近端小管细胞减少，而 目前认为肾透明细胞癌起源于 PCR内参。引物序列 ：Notchl：上游引物：5一GTGACT． 肾小球近端小管细胞。已有研究 提示，Notchl可以 GCTCCCTCAACTTCAAT一3，下游 弓l物 ：5一CTGTCA— 通过调节第 10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同 CAGTGGCCGTCACT一3；HES1：上游引物：5一ACGT． 源的基因(PTEN)从而影响PI3K／AKT信号通路 的活 GCGAGGGCGTFAATAC一3，下 游 引物：5 一A，IYI’． 性。本实验检测磷酸化 AKT及 Notchl蛋白在肾透明 GATCTGGGTCATGcAGTTG一3；PPIA：上游 弓I物：5一 细胞癌组织中的表达情况及其与临床指标之 间的关 ATGGTCAACCCCACCGTGT一3，下游引物：5一TCT． 系，在肾透明细胞癌