PKG Ⅱ基因缺陷对成年小鼠胫骨形态和结构的影响.pdfVIP

· 2488 · 广东医学 2015年 8月 第 36卷第 16期 GuangdongMedicalJournal Aug．2015，Vo1．36，No．16 PKG II基 因缺陷对成年小 鼠胫骨形态和 结构的影响 陈琚 ，陈怡婷 ，卢丽 ，杨国柱 ，陆幸妍 ，吉宏龙 ，李青南 广东药学院生命科学与生物制药学院(广州 510006)；德克萨斯大学泰勒分校健康中心(美国泰勒75708) 【摘要】 目的 探讨cGMP依赖性蛋白激酶G Ⅱ(PKG Ⅱ)基因缺陷对成年小鼠胫骨骨形态和结构的影响。 方法 PKG Ⅱ基因缺陷[PKG Ⅱ(一／一)组]与正常[PKG 11(+／+)组]雄性小鼠各5只，正常饲养至 l5周龄时 处死并分取胫骨，骨形态计量学分析胫骨上段、中段的骨量与骨结构情况。结果 PKG Ⅱ(一／一)组小鼠胫骨明 显比PKG Ⅱ(+／+)组小鼠的细、短、小。骨形态计量学测量结果表明，PKGII(一／一)组小鼠胫骨上段松质骨骨 量显著丢失，骨小梁数 目明显减少，宽度显著减少，且分离度显著增大，单位成骨细胞数量及其贴壁周长显著减 少，而单位破骨细胞数量及其贴壁周长明显增加；胫骨中段骨组织总面积、皮质骨骨量和皮质骨厚度均显著减少， 而骨髓腔面积百分比显著增大。结论 PKG Ⅱ基因缺陷小鼠的胫骨骨量较低且形态结构破坏明显，提示PKG 11 基因影响骨的重建和代谢，其机制可能与抑制成骨细胞的骨形成，而破骨细胞功能亢进有关。 【关键词】 PKG II；基因敲除；胫骨；松质骨；皮质骨；骨组织形态计量学 eGMP依赖性蛋 白激酶 G(cGMP—dependentpro- 1．2 骨标本脱钙包埋及制片 戊 巴比妥钠麻醉小鼠， teinkinaseG，PKG)是广泛存在于真核细胞 内的一种 心脏抽血处死 ，取左侧胫骨锯出上段[即胫骨近侧干骺 丝／苏氨酸蛋白激酶”，作为 cGMP的下游信号分子 ， 端 (proximaltibiametaphysis，PTM)]和中段 [即胫骨干 PKG在哺乳动物细胞中主要有 PKG I 、PKG I8和 中段 (middlepartoftibiashaft，TX)]，经质量浓度为 PKG Ⅱ3种类型，在骨组织细胞中发挥作用的主要是 100g／L的EDTA脱钙处理后用 LeicaEG1160型包埋 PKG Ⅱ 。1996年，PFEIFER等 首次指 出缺 乏 机 (LeicaCo．Germany)行石蜡包埋。用 LeicaRM2500 PKG lI会严重干扰小鼠的软骨内成骨 ，使长骨发育异 型切片机 (LeicaCo．Germany)将PTM和TX切出4 m 常，近年来的研究证实 PKG 11不仅直接调节软骨细胞 薄片，采用HE染色法对切片染色。 的分化、介导软骨 内成骨 ，也参与成骨细胞的压力 1．3 骨组织形态计量学检测 本研究使用的所有松 信号传导过程 ；内皮细胞型一氧化氮合成酶或其下 质骨、皮质骨形态学参数指标 (包括成骨细胞、破骨细 游效应器 PKG缺乏的老 鼠都表现出骨生长异常 。 胞参数指标)均取 自国际通用的标准骨组织形态计量 但现有研究多关注PKG Ⅱ对小 鼠骨生长发育即骨建 学术语命名法之一的Dr．FrostandJee教授团队命名 造的影响，而未见反映PKG 11基因敲除对成年小鼠骨 法 ，以HE染色后 的标本切片按骨形态计量学测 重建影响的报道。我们在前期研究 中已证实 cGMP／ 定要求规范测量区域后 ，首先经 BIOQUANTOSTEO骨 PKG Ⅱ信号通路参与调节成骨细胞功能 。2011年 组织形态 图像分析系统 (BIOQUANTImageAnalysis 11月至2013年 6月，本研究着眼于 PKG Ⅱ基因缺陷 Corporation)测量获得二维参数 (即测量参数，如骨小 小鼠成年后的骨重建情况，观察其胫骨皮质骨和松质 梁面积、皮质骨面积、成骨细胞数等)，再通过该软件计 骨骨量、骨结构和成骨细胞 、破骨细胞 的变化，探讨 算得到三维参数 (即计算参数 ，如骨小梁面积百分 比、 PKG II在骨代谢中的调节作用并分析可能的机制。 皮质骨面积百分比、单位成骨细胞数等)，并根据骨组 1