Plk1磷酸化修饰PinX1对宫颈癌HeLa细胞有丝分裂及凋亡的影响.pdfVIP

JournalofZhengzhouUniversity(MedicalSciences) May 0l_ ． · 323 · doi：10．3969／j．issn．1671—6825．2013．03．008 Plkl磷酸化修饰 PinXl对宫颈癌 HeLa细胞有丝分裂及凋亡 的影响 王 冲¨，余 建 ，黄 河’ 1)郑州大学第一附属医院血液科 郑州 450052 2)浙江大学附属第一医院骨髓移植 中心 杭州 310003 群通讯作者 ，男 ，1961年6月生 ，教授 ，主任医师，研究方 向：血液系统恶性肿瘤 的临床及基础 ，E-mail：hehuang．zju@gmail．com 关键词 Plkl；PinX1；凋亡 ；磷酸化 ；有丝分裂 中图分类号 R730．231 摘要 且的：探讨有丝分裂激酶 Plkl通过磷酸化修饰 PinX1调控宫颈癌 HeLa细胞有丝分裂及凋亡 的作用 。 方法：运用酵母双杂交、免疫共沉淀、谷胱甘肽．S转移酶沉降实验了解 Plkl与PinX1在体 内外是否能够相互结合采 用 ；采用体 内外磷酸化实验明确 Plkl是否能够磷酸化修饰PinX1；采用免疫荧光染色及流式细胞术检测 PinX1磷酸 化对HeLa细胞有丝分裂及凋亡的影响。结果：Plk1与PinX1在体 内外均能结合；Plkl在体 内外均可磷酸化修饰 PinX1；过量表达 PinX1的非磷酸化突变体能够阻碍HeLa细胞的有丝分裂进程 ；过量表达PinX1的磷酸化突变体导 致细胞凋亡的增加 (F=76554．133，P0．001)。结论：Plkl与 PinX1相互结合并通过磷酸化修饰PinX1阻碍细胞 有丝分裂进程及促进细胞凋亡。 EffectsofPinX1phosphorylationbyPlklonmitosisandapoptosisofeer— vicalcancerHeLacells WANG Chong¨， YUJian ，HUANGHe _，)DepartmentofHematology，theFirstAffiliatedHospital，ZhengzhouUniversity，Zhengzhou450052 2) DepartmentofBoneMarrowTransplantation，theFirstAffiliatedHospital，ZhejiangUniversity，Hangzhou 310003 Keywords Plkl；PinX1；apoptosis；phosphorylation；mitosis Abstract Aim ：ToinvestigatetheeffectsofphosphorylationofPinX1byPlklonmitosisandapoptosisofcervical cancerHeLacells．Methods：Usingyeasthybridationassay，CO—immunoprecipitationandGSTpull—downassaytOdetermine thedomain ofPlklandPinX1bindingandinteractioninvitroandinvivo．TocheckthephosphorylationofPinX1byPlkl usinginvitrophosphorylationassay．Immunofluorescenceassayandflow cytometrywereusedtoanalyzetheeffectofphos— phorylation ofPinX1Oilapoptosisandmitosis．Results：PlklinteractedwithPinXlandcouldbephosphorylatedbyPinX1 invivoand in vitro．Overexpression ofphospho—mimickingmutantofPinX1inHelacellsresuhed insignificantmitosisde— layandapoptosis(X =76554．133，P0．001)．Conclusion：PlklandPinX1couldinteractedandthePlkl—mediated