pPICZαA—CDK2重组质粒的构建及表达.pdfVIP

实用医学杂志2011年第 27卷第 l6期 2917 免疫反应较强、生产成本高、可能产生致病 的野生 基因及其与肿瘤的关系提供 了实验基础。 型病毒。而质粒 DNA具有操作简单、可容纳插入 4 参考文献 序列大、整合和扩散危险性小 、制备容易、生产成 [1] LuR，MaduroM，LiF，eta1．Animalvirusreplicationand RNAi—mediated antiviral silencing in Caenorhabditis elegan 本低等优点。另外，质粒 DNA的抗原性低 ，不会引 [J]．Nature，2005，436(7053)：1040—1043． 起病毒载体那样 的严重免疫反应 。所 以本研究采 [2] WangXH，AliyariR，LiW X，eta1．RNAinterference 用阳离子脂质体为导人介质的质粒系统。质粒表 directsinnateimmunityagainstviursesinadultDrosophila[J]． 达载体在细胞 内直接转录 shRNA，可建立稳定表 Science，2006，312(5772)：452-454 达 shRNA的细胞克隆．延长 RNA干扰效应。不存 [3] LiWX，LiH，LuR，eta1．Interferonantagonistproteinsof infuenzaandvacciniavirusesaresuppressorsofRNA silencing 在 向细胞 内直接导入 siRNA那样维持时间短 、体 [J]．PNAS，2004，101(5)：1350-1355． 内运载难和转染效果不稳定等缺点。 f4] 张涛 ，程通，张雅丽 ，等．靶向HIV一1vif的高效 siRNA的 本研究中采用了ABI公司plk0．1．puro质粒为 筛选及慢病毒介导的体外抗病毒研究 [J]．病毒学报，2008， 表达载体 ．具有一个hU6启动子。hU6启动子属于 24(2)：88—95． f51 Hu W Y， MyersC， KilzerJ． Inhibition ofretroviral RNA聚合酶Ⅲ启动子 ，能在哺乳动物细胞中指导 pathogcnesisbyRNA interference [J]．CurrBiol， 2002，12 合成 shRNA，再 以连续的5个 T终止。有研究表 (15)：1301—1311． 明．Hl启动子表达载体的抑制效果好于同为 RNA [6] GitlinL，KarelskyS，AndineR．ShortinterferingRNAconfers 聚合酶 Ⅲ启动子 的 U6启动子 。本研究通过 intracellularantiviralimmunityinhumancells [J1． Nature， 2002，418(6896)：430-434． LipofectamineMT2000转染Hep一2细胞。脂质体转染