siRNAs干扰EBNA1下调EBV阳性鼻咽癌细胞内ALOX12的表达.pdfVIP

第 31卷 第 6期 中山大学学报(医学科学版) Vol31 No．6 2010年 11月 JOURNALOFSUNYAT—SENUNIVERSITY(MEDICALSCIENCES) NOV． 2OlO · 基础研究 · siRNAs干扰 EBNA1下调 EBV阳性鼻咽癌细胞内 ALOX12的表达 刘文举，王凤伟 ，买世娟 (华南肿瘤学国家重点实验室∥中山大学肿瘤防治中心实验研究部，广东 广州 510060) 摘 要：【目的】利用 RNA干扰技术抑制C666—1细胞中EB病毒核抗原 1(EBNA1)的表达，探索氧化应激与抗氧化相 关基因的表达变化。 【方法 】采用蛋白质印迹证实了能有效抑制EBNA1表达的干扰序列 ，使用甲基噻唑基四唑(MTr)方法 检测 C666—1细胞的存活率 ，利用实时定量 PCR芯片技术探索了氧化应激与抗氧化相关基因的转录谱变化 ，并通过反转录 聚合酶链反应 (RT—PCR)和蛋白质印迹进行了验证。 【结果】EBNA1．1414和EBNA1—1437干扰序列转染 C666一l细胞48h 后 。分别可抑制 59％和 56％的EBNA1蛋 白表达 。细胞存活率分别降低了33％和 24％。PCR芯片实验发现干扰 EBNA1表达后 48hC666—1细胞 中花生 四烯酸盐 12一脂氧合酶 (ALOX12)蛋 白表达有下调 ，谷胱甘肽还原酶 (GSR)和过氧化物酶 3(PRDX3) 在转录水平表达上调。 【结论 】EBNA1或许能够通过上调 ALOX12的表达间接地发挥促鼻咽癌作用。 关键词 ：EB病毒 ；EB病毒核抗原 1；RNA干扰 ；鼻咽癌 中图分类号：R73—3 文献标志码 ：A 文章编号：1672—3554(2010)06—0755—06 siPd~AsTargetingEBNA1Down-regulateALOX12Expression inEBV Positive NPC CellLine LIUWen-ju，WANGFeng—wei，MAIShi—juan (StateKeyLaboratoryofOncologyinSouthernChina／／DepartmentofExperimentalResearchCancerCenter， SunYat—senUniversity，Guangzhou510060，China) Abstract：【Objective】TosuppressEpstein—Barrvirusnuclearantigen1(EBNA1)expressioninC666—1cellsbyusingthe RNA interference strategy， and investigate expression change ofgenesinvolved in oxidative stressand antioxidantdefence response． M【ethods】SmallinterferingRNAstargetingEBNA1wereverifiedbyWesternblot．ThesurvivalofC666—1cellswas measuredbythemethylthiazolyltetrazolium (MTr) assay．Thetranscriptionalprofilingofgenesinvolvedinoxidativestressand antioxidantdefenceresponsewasanalyzedbyusingreal--timePCR--mieroarraymethod and thePCR--microarray resultwasverified byreversetranscriptionpolymerasechainreaction(RT—PCR)andW