Rock信号通路在TGF-β_1刺激大鼠颈内动脉平滑肌细胞表型转化中的作用及可能机制.pdfVIP

· 2228 · 广东医学 2016年8月 第37卷第 15期 GuangdongMedicalJournal Aug．2016，Vo1．37，No．15 Rho／Rock信号通路在TGF—I3刺激大鼠颈内动脉 术 平滑肌细胞表型转化中的作用及可能机制 曹飞鹏 ，黄树文，麦树荣 广州医科大学附属第四医院神经外科 (广州511447) 摘【要】 目的 探讨Rho／Roek信号通路在TGF—p。刺激大鼠颈内动脉平滑肌细胞(ISMC)表型转化中的作 用及可能机制。方法 ISMC随机分为两组：空白对照组和TGF—B】刺激组，以不同浓度 (1、5、1O、20、50ng／mL) TGF—Bl刺激细胞24h，用荧光实时定量PCR法检测转凝蛋白(SM22a)和骨桥蛋白(OPN)mRNA的表达；再以上 述得 出的最佳 TGF—p 浓度刺激细胞，在不同时间(6、12、24、48h)收集细胞，采用同样方法检测 SM22a、OPN mRNA的表达水平；经无血清DMEM高糖培养基静止培养24h后 ，随机分为以下各组：空白对照组、TGF—pl(10 ng／mL)刺激组及 TGF—p】(10ng／mL)+法舒地 尔(Fasudil)(10、30、50I~mol／L)组，分别采用FQ—RT—PCR法检 测SM22c~、OPN、RhoA、Rock一1mRNA的表达；Westernblot法检测SM22a、OPN蛋白表达水平；根据实验结果用透 射 电镜观察各组细胞超微结构的相应变化。结果 10ng／mLTGF—p】刺激大 鼠ISMCs24h达顶峰。TGF—p1+ Fasudil组SM22o~mRNA和蛋白表达水平较TGF—B】刺激组高(P0．01)，且在 Fasudil浓度为30i~moL／L时达到 高峰 ，随后下降；TGF—p】+Fasudil组 OPNmRNA表达水平较TGF—pl刺激组低，呈浓度依赖性，至30p,mol／L达 最低 (P0．05)，后又呈上升趋势。Westernblot结果显示TGF—p。+Fasudil组的OPN蛋 白表达水平较 TGF—pl 刺激组低，至Fasudil浓度为 30~zmol／L达最低 (P0．05)。同时FQ—RT—PCR结果显示TGF—B1刺激组的 RhoA和Rock一1mRNA表达水平较空白对照组高(P0．O1)，在 Fasudil浓度为30vmol／L时TGF—Bl+Fasudil 组的RhoA和Rock一1mRNA表达水平较TGF—B1刺激组低 (P0．05)。电镜下观察各组细胞显示，空白对照组 (×20ooo)ISMC高尔基体肥大，线粒体及粗面内质网正常，10ng／mLTGF—p。刺激后细胞内线粒体增多，在上述 基础上加入 30p~mol／LFasudil后电镜下观察细胞又回到正常成熟结构状态。结论 10ng／mLTGF一 】刺激大鼠 ISMC24h可成功刺激其表型转化 ，且该过程可能通过Rho／Rock信号通路实现；Rho／Rock信号通路抑制剂Fasudil 可增加TGF—B1刺激的SM22et的表达，下调 OPN的表达水平，抑制大鼠ISMCs表型转化。 【关键词】 Rho／Rock；信号通路；颈内动脉；平滑肌细胞；表型转化；转化生长因子p。 TheeffectandpossiblemechanismoftheRho／RocksignalingpathwayduringTGF—B1一inducedISMCspheno- typicmodulationinrats． CAOFei—peng，HUANGShu—wen，MAIShu—rong．Departmentofneurosurgery，The FourthAffiliatedHospitalofGuangzhouMedicalUniversity，Guangzhou511447，China 【Abstract】 Objective ToinvestigatetheeffectsandpossiblemechanismoftheRho／Rocksignalingpathwayon TGF—Bl—inducedofratISMCsphenotypicmodulation．Methods TheratISMCswererandomlydividedintotwo groups：blankcontrolgroupandTGF—plstimulationgroup，inwhichTGF—p