siRNA干扰AT1R基因调控链脲佐菌素诱导NIT-1细胞凋亡的实验研究.pdfVIP

广东医学 2016年6月第 37卷第 11期 GuangdongMedicalJournal Jun．2016，Vo1．37，No．11 ·1593· 差 础 | 9 siRNA干扰 AT1R基因调控链脲佐菌素诱导 NIT一1细胞凋亡的实验研究 ：=l 莫丽雯 ，梁杏欢 ，邝晓聪 ，李海滨。，李励 ，蔡劲薇 ，卢德成 广西医科大学第一附属医院内分泌科(南宁530021)；广西医科大学病理生理学教研室(南宁530021)；中国 人民解放军第三O三医院移植医学研究院(南宁530021) 【摘要】 目的 用siRNA干扰技术沉默小鼠胰岛素瘤NIT一1细胞血管紧张素 Ⅱ1型受体(AT1R)基因，探 讨其对链脲佐菌素(STZ)诱导的胰岛素瘤细胞凋亡的影响。方法 针对小鼠AT1R基 因，设计并合成3对 siRNA 序列，脂质体法转染至NIT一1细胞，荧光显微镜观察荧光强度检测转染效率，Real—timePCR检测 AT1RmRNA 表达量判断不同干扰序列及干扰时间的基因沉默效果；分4组：空白组不予任何干预，STZ组予5mmoIZLSTZ干 预 30min，si—AT1R组予40nmoL／Lsi—AT1R转染24h，si—AT1R+STZ纽予40nmoL／Lsi—AT1R转染24h后5 mmoL／LSTZ干预30min；Real—timePCR检测Caspase一3mRNA表达量，Hoeehst33342染色荧光显微镜和Annex— inV—FITC／PI流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 40nmol／LsiRNA转染的荧光强度最强，转染后 AT1RmRNA 表达量明显下降，si—AT1R一2转染24h的沉默效果最佳 (92．20％)；Caspase一3mRNA表达量 ：STZ组与空白组 比增加 了2．37倍 (P0．05)，si—AT1R+STZ组与STZ组比减少了11．28％，但差异无统计学意义；细胞凋亡率： STZ组与空白组比增加了3．27倍 (P0．05)，si—AT1R+STZ组与STZ组比减少了26．82％(P0．05)。结论 本研究建立了稳定的胰 岛细胞AT1R基因沉默模型；RNA干扰沉默胰岛细胞 AT1R基 因可通过下调 Caspase一3 mRNA表达量降低 STZ诱导的细胞凋亡率，提示AT1R介导了STZ诱导的胰岛细胞凋亡过程。 【关键词】 RNA干扰；胰岛素瘤细胞；细胞血管紧张素 Ⅱ1型受体；链脲佐菌素；凋亡 EffectsofAT1R genesilencinginapoptosisinducedbySTZinNIT 一1cells． D 一wen ，HANG 一huan， K J7、Xiao—cong，LIHai—bin，LILi，CA，Jin—wei， De—cheng． DepartmentofEndocrinology，theFirstAffilia— tedHospitalofGuangxiMedicalUniversity，Nanning530021．Cina Correspondingauthor：LU De—cheng．E—mail：237540679@ qq．con 【Abstract】 0bjective ToinvestigatetheeffectsofsilencingangiotensinIItype1receptor(AT1R)inapoptosis inducedbySTZ inmiceisletcellsNIT一1．Methods ThreepairsofsiRNA targetingAT1R weredesignedand synthe． sized．TheyweretransfectedintoNIT—lbyliposometransfection．Fluorescencemicroscopywasusedtoexaminetheeffect ofdifferentsiRNA concentrationonthetransfectionefficiency．AT1RmRNAexpressionwasdetectedwithreal—timePCR tocomparesilencingeffectsamongthethreesiRNA sequenceanddifierentdurationsofinterferenee．NIT一1cellswereal。 loc