具有良好抗细胞收缩能力的胶原基组织工程皮肤支架构建.PDFVIP

具有良好抗细胞收缩能力的胶原基组织工程皮肤支架构建 马列 毛峥伟 高长有沈家骢 浙江大学高分子科学与工程学系，杭州 310027 关键词：胶原 收缩 交联 支架 组织工程 由于烧伤、机械损伤以及慢性皮肤溃疡导致的皮肤缺损一直是危害人类生命 和健康的临床难题。皮肤组织工程的研究和发展为彻底解决皮肤缺损问题开辟了 [1, 2] 新途径 。胶原以其优良的生物相容性而广泛用于组织工程皮肤支架的构建， 然而未改性胶原具有降解速度过快、易收缩变形以及机械性能不足等缺点。物理 [3-5] 或化学交联处理可有效改善胶原支架的上述缺点，提高支架的生物稳定性 。 胶原支架在细胞作用下的收缩行为是评价支架生物稳定性的一个重要指标。支架 在细胞介导下的收缩易导致支架特定微结构及外观形状发生改变，从而影响细胞 在支架中的增殖与功能表达[6] 。本文通过对胶原基支架的交联改性构建具有良好 抗细胞收缩能力的组织工程皮肤支架。 本文采用冷冻－冻干法构建胶原/壳聚糖多孔支架，经干热交联预处理后，采 用戊二醛为交联剂，4°C 交联处理24 小时获得交联后胶原基支架。以新生儿包 皮环切术所得包皮为原料，体外大量扩增人成纤维细胞，采用注射法将多孔支架 与人成纤维细胞复合，进行体外培养。通过测定各类胶原基支架 （种植细胞和未 种植细胞）在不同培养时间的直径相对于原始直径的变化，得到支架于体外培养 下的收缩系数（cell-mediated contraction ）： CMC 原始直径- 培养后直径 −原始直径- 培养后直径  原始直径 种植细胞  原始直径 未种植细胞 进而研究不同交联条件对支架抗细胞收缩能力的影响。采用扫描电子显微镜 （SEM）考察了细胞种植前后胶原支架的微结构变化。并通过细胞活性测定研究 支架收缩行为对细胞增殖与分布的影响。 图 1 比较了不同方法交联的纯胶原支架与胶原/ 壳聚糖支架的收缩系数 （CMC ）随培养时间的变化。未经任何交联处理的胶原基支架的机械强度太差， 难以进行细胞种植，因此本文未对其抗细胞收缩能力进行评价。由图1 可见，干 热交联纯胶原支架 （Col-DHT ）种植细胞3 天后即发生了强烈的收缩，其收缩系 数达到了0.335 。随着培养时间的进一步延长，该支架的收缩系数最终达到0.7 。 由此可见DHT 交联的纯胶原支架在成纤维细胞作用下的收缩程度也过大，不适 于作为皮肤再生支架。添加壳聚糖为交联桥联后，Col/Chi-DHT 支架的抗细胞收 缩稳定性得到了一定程度的提高。但该类支架在培养21 天后的收缩系数仍然高 达 0.564 。戊二醛交联改性的胶原/ 壳聚糖支架表现出非常优异的抗细胞收缩能 力，在整个培养过程中，从支架宏观形貌上很难观察到收缩行为的发生，其收缩 系数始终未超过0.15 。此外，0.1 ％GA 和0.25 ％GA 支架的CMC 非常接近，说 明当戊二醛达到一定浓度后，戊二醛交联改性的胶原/壳聚糖支架已经具有足够 的强度抵抗细胞的收缩力，进一步增大交联剂的浓度对支架的抗细胞收缩稳定性 无明显的促进作用。 0.8 0.7 col-DHT col/chi-DHT 0.6 0.1% GA 0.25% GA 0.5