松果体及其褪黑素对大鼠胸腺上皮细胞IL-7表达影响.pdfVIP

松果体及其褪黑素对大鼠胸腺上皮细胞 IL一7表达的影响 研究生：黄云梅 指导教师：周瑞祥副教授 中文摘要 目的 通过研究松果体摘除和补充褪黑素，以及体外褪黑素干预对大鼠胸腺上皮细 胞表达IL．7的影响，探索松果体褪黑素影响胸腺细胞分化发育的机制，进一步揭 示松果体褪黑素与胸腺的关系，从而丰富人类对神经．内分泌．免疫网络的认识。 方法 ①消化法原代培养大鼠胸腺基质细胞，差数贴壁和差别消化法纯化出胸腺上 皮细胞，应用广谱角蛋白抗体做免疫细胞化学染色进行鉴定； ②运用MTT法观察褪黑素干预对体外培养胸腺上皮细胞生长的影响，半定量 RT-PCR法观察胸腺上皮细胞经褪黑素干预后IL一7mRNA表达的变化； ⑨建立松果体摘除动物模型：选用2月龄雄性清洁级SD大鼠110只，分为正 常对照组、假手术对照组、松果体摘除组、松果体摘除+褪黑素腹腔注射7．5mg·kg ～·day-1组和松果体摘除+褪黑素腹腔注射15mg·kg-1day-1组，松果体摘除组动物 腹腔注射等量生理盐水，术后4、8周取材。 ④运用免疫组织化学法和半定量RT-PCR法观察松果体摘除及补充褪黑素 后，大鼠胸腺上皮细胞IL，7表达的变化。 结果 ①体外培养和纯化的胸腺基质细胞经鉴定证明90％以上为胸腺上皮细胞； mRNA ②褪黑素干预对大鼠胸腺上皮细胞的生长没有显著影响，但能使IL．7 的表达水平明显升高，且呈剂量依赖性： ③松果体摘除后大鼠胸腺IL．7免疫组化和RT-PCR的结果与假手术对照组相 比无显著差别； ④与对照组相比，松果体摘除大鼠补充高剂量褪黑素4w后，免疫组化结果 显示胸腺IL一7阳性面积增加、平均灰度下降，RT-PCR结果显示m]刚A水平显著增 高，但8W后均下降至正常水平a 结论 ． 培养大鼠胸腺上皮细胞经褪黑素干预后IL一7的表达水平呈剂量依赖性升高a 松果体摘除对大鼠胸腺IL一7的表达没有影响，但补充大剂量外源性褪黑素后在一 定时间内能使IL一7的表达显著增高，长时间作用则其作用逐渐消失。 关键词 MTT免疫组织化学 松果体褪黑素大鼠细胞培养胸腺上皮细胞IL一7 RT—PCR Effectof andmelatoninonIL_7 gland expression pineal rat cells of thymicepithelial Yunmei Postgraduate：Huang Tutor：ProfessorZhou Ruixiang Abstract objective To effect melatonin on the investigateofpinealectomy(Px)andsupplementation rat vivoaswellasthefunctionof IL一7 cells(TEC)in by thymicepithelial expression in understandthe