抗甲状腺药物致Graves病患者粒细胞缺乏高表达基因的筛选与克隆研究.pdfVIP

ChineseGeneralPractice ~ · 2921 · 嗣 澜黔 · 论 著 · 抗甲状腺药物致 Graves病患者粒细胞缺乏高表达基因的 筛选与克隆研究 钟 警，杨 靖，周 斌，刘江华，曹仁贤，文格波 摘【要】 目的 筛选可能对抗甲状腺药物 (ATD)致 Graves病 (Gravesdisease，GD)患者粒细胞缺乏起决定 作用的相关基因。方法 采用淋巴细胞分离液分离GD服用ATD导致粒细胞缺乏患者与粒细胞正常患者的单个核细胞， 加入EB病毒进行细胞培养，应用抑制性消减杂交 (SSH)的方法构建GD服用ATD导致粒细胞缺乏患者与粒细胞正常 患者之间差异表达的cDNA消减文库，克隆、鉴定ATD介导GD患者粒细胞缺乏特异性高表达的基 因片段，以生物信 息学方法进行初步分析。结果 成功构建了人 ATD介导GD患者粒细胞缺乏的cDNA消减文库；初步筛选到34条 EST，其中21条为新EST，它们可能代表着在ATD介导GD患者粒细胞缺乏中特异性高表达并对ATD介导GD患者粒 细胞缺乏的发生有促进作用的新基因。结论 高效消减文库的成功建立，对进一步筛选、克隆GD差异表达的未知新 基因和已知基因的新生物学功能研究具有重要意义。 【关键词】 抗甲状腺药；格雷夫斯病；粒细胞缺乏；抑制性消减杂交技术；基因 【中图分类号】R736．1 【文献标识码】A 【文章编号】1007—9572 2【010)O9—2921—05 ScreeningandCloningofHighlyExpressedGenesinPafien~ ofGravesDiseasewithAgranniocytosisResnitfrom Anti- thyroidDrugs ZHONGring，YANGJing，ZHOUBin，eta1．InstituteofClinicalResearchDepartment，theFirstAffiliated HospitalofNanhuaUniversity，Hengyang421001，China 【Abstract] Objective ToscreenthehighlyexpressedgenesthatmayplayafocalroleinGDpatientswithagranulocy~ tosisthatresultsfrom anti～thyroidglanddrugs．Methods LymphocyteSeparationMedium wasusedtoseparatemononuclera cellsrfom patientsofGD withagranulocytosisandnormalpatients．EBviurswasusedtoculturethecells，andSSH approachwas appliedtoconstructcDNA subtractivelibraryofdifferentialexpressionbetweenthepatientsofGD withagranulocytosisandnormal patients。Thehighlyexpressedgeneswereclonedandsequenced．Th esequencingresultswerecomparedinbioinfomr aticsap— proach．Results A highlyefficientsubtractivecDNA librarywasestablished．34ESTswereobtained，ofwhich21cloneswere foundtobenovelESTsasclueswereassociatedwiththem bybioinformatieanalysis．Conclusion Thesuccessfulconsturctionof subtractivecDNA librarywassignificantfortheintensivescreening，cloningtheGraves diseaseSspecificunknownnew genes andstud