泛素结合酶E2T在消化系统肿瘤中的表达.pdfVIP

广东医学 2014年 3月 第35卷第 5期 GuangdongMedicalJournalMar．2014．Vo1．35．No．5 · 687 · 泛素结合酶 E2T在消化系统肿瘤中的表达木 曹传辉 ，梁基韵 ，孙景苑 ，郭学军 ，刘莉 ，吴德华 南方医科大学南方医院 放疗科，感染内科肝脏肿瘤 中心(广州510515) 【摘要】 目的 探讨泛素结合酶E2T(UBE2T)在消化系统肿瘤中的表达及其临床意义。方法 应用组织芯 片技术结合免疫组织化学方法，检测并分析UBE2T在由37例恶性消化系统肿瘤组织及 11例消化系统正常组织 制成96个点的组织芯片中的表达情况。结果 UBE2T在消化系统恶性肿瘤的高表达率为86．5％(32／37)，明显 高于正常组织的9．1％(1／11)，差异有统计学意义(P0．001)。结论 UBE2T在消化系统恶性肿瘤组织中呈高 表达，可能与消化系统肿瘤的发生相关。 【关键词】 泛素结合酶E2T；消化系统肿瘤；组织芯片；免疫组织化学 泛素结合酶 E2T(ubiquitin—conjugatingenzyme 准分类 ，经病理证实。 E2T，UBE2T)也称HSPC150，是泛素结合酶E2家族成 1．3 组织芯片 购 自西安艾丽娜生物科技有限公司， 员之一 ，具有一个特征性的大小为 16～18kD的保守 其方法主要参照 KONONEN等 创建的方法 ，用构建 结构域——泛素结合结构域。越来越多的研究指出， 仪器 (美国产 ，ManualTissueArrayer)在一新的空白蜡 泛素结合酶 E2作为泛素 一蛋白酶系统 中的重要成员 块上穿孔，孑L径0．16mm，然后选取48例肿瘤组织及 之一，与细胞的增殖 、凋亡 、免疫应答 、肿瘤的发生等密 对照组织蜡块 ，穿刺取直径0．16mm具有代表性病变 切相关” 。 目前 已发现 UBE2T在膀胱癌 、肺 的组织 (包括肿瘤和对照组织)，准确放入空白蜡块小 癌 、前列腺癌 、乳腺癌 等组织中表达上调，进一 孔内，依次按序操作 ，直至将 96例组织标本全部种植 步在乳腺癌的研究表明，UBE2T可调控细胞的增殖 ，促 于空白蜡块 中，4 m连续切片。 进肿瘤的发生 ，提示其可成为肿瘤治疗 的新靶点 。 1．4 免疫组织化学染色法 将组织石蜡切片置于 但是 UBE2T在消化系统恶性肿瘤组织中的表达情况 65℃烤箱中烤2h，应用二甲苯脱蜡 ，梯度酒精水化，用 尚不清楚。因此，本研究首次对 UBE2T在消化系统多 蒸馏水洗2次。3％ HO：室温孵育 10min，蒸馏水冲 种恶性肿瘤组织中的表达水平进行检测 ，探讨其在肿 洗 ，pH=6．0枸橼酸盐缓冲液中高压抗原修复3min， 瘤中的表达意义，为后期研究 UBE2T在恶性肿瘤 中的 PBS冲洗 ，UBE2T多克隆抗体 (1：300)4~C孵育过夜； 作用及机制提供实验基础。 PBS冲洗 ，滴加生物素标记二抗工作液 ，室温孵育 60 1 资料与方法 min；PBS冲洗 ，DAB显色试剂盒显色，苏木素复染 ，蒸 1．1 试剂 UBE2T鼠抗人多克隆抗体购 自NOVAS 馏水洗涤，梯度酒精脱水、透明、封片。 公司，生物素标记二抗工作液和DAB试剂盒购 自Dako 1．5 结果判定 UBE2T阳性反应物为均匀分布于细 公司(编号k5007)。 胞质内的淡黄色至棕褐色颗粒，随机观察每张切片 10 1．2 组织标本及 临床资料 所有恶性肿瘤组织及正 个高倍镜视野 (×400)，每个视野计数500～1000个 常组织标本均由西安艾丽娜生物科技有限公司提供 ， 细胞。根据阳性细胞所 占的百分数进行评分：根据细 收集时间为2003年 1月至2010年 12月，共 96点，包 胞阳性程度评分 ：无着色为阴性，淡黄色为弱阳性 ，棕 括恶性肿瘤组织37例 (食管癌 、胃癌和结肠癌组织各 黄色为中阳性 ，褐黄色为强阳性。结果判定 ：阴性和弱 7例 ，肝细胞癌组织6例 ，直肠癌组织4例 ，小肠癌组织 阳性为低表