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第三章、动物细胞工程制药 细胞工程： 是以细胞为单位，按照人的意志，应用细胞生物学、分子生物学等理论和技术，使细胞的某些遗传特性发生改变，从而达到改良或产生新品种的目的，以及使细胞增加或重新获得产生某种特定产物的能力，从而在立体条件下进行大量培养、增殖，并提取出对人类有用的产品。 第二节 动物细胞的形态和生理特点 一、动物细胞的形态 动物细胞为了各自有明确的分工，为了适应相应功能,具有各异形态。 离体培养细胞分三类： 贴壁细胞 悬浮细胞 兼性贴壁细胞 ⒈贴壁细胞 生长须有贴附的支持物表面，自身分泌或培养基中提供的贴附因子才能在该表面上生长。 两种形态： 成纤维细胞型 上皮细胞型 兼性贴壁细胞 ⒉悬浮细胞 生长不依赖支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长。如淋巴细胞。 ⒊兼性贴壁细胞 生长不严格依赖支持物，既可以贴附于支持物表面生长，但在一定条件下，他们还可以在培养基中呈悬浮状态良好地生长。如中国地鼠卵巢细胞，小鼠L929细胞。 二、动物细胞的化学组成和代谢 1.动物细胞的化学组成 所有的细胞都含有水、无机盐和有机质。其中有机质包括蛋白质、糖类、脂质和核酸。 2.动物细胞的代谢 糖类、脂肪和蛋白质的代谢，一般都可以分为3个降解阶段。 大分子 小分子 中间产物 三羧酸循环 三、动物细胞的生理特点 ⒈细胞的分裂周期长 细胞分裂时间为12～48h，细胞的分裂 周期=间期+分裂期 间期（G1+S+G2） 分裂期（M） G1期：4～6h 合成DNA聚合酶 RNA合成 S期：6～8h DNA合成 G2期：2～5h DNA量加倍, RNA合成 M期：0.5～1h 染色体分裂 ⒉细胞生长需贴附于基质,并有接触抑制现象。 接触抑制现象： 细胞在基质上分裂增殖，与周围细胞相接触时，细胞就停止增殖。若能维持充足营养，细胞还能再存活相当长一段时间，但细胞密度不再增加的现象。 ⒊正常二倍体细胞的生长寿命是有限的。 原代培养 有限细胞系 无限细胞系 ⒋动物细胞对周围环境十分敏感. 各种理化因素：渗透压、pH、离子浓度、剪切 力、微量元素等。 动物细胞生产药物 缺点:培养条件高、成本贵、产量低。 优点:分泌胞外、纯化方便、翻译 后修饰糖基化，与天然产品一致。 将裸鼠的背上割开一个口子，然后将已经培养好的“人耳”植入后缝合。“人耳”是在此之前一周开始制备的。先用一种高分子化学材料聚羟基乙酸做成“人耳”的模型支架，然后让细胞在这个支架上繁殖生长。支架最后会自己降解消失，“人耳”便与老鼠浑然成为一体。 基因工程猪即把人的基因转入猪的全身组织细胞中，并用基因工程的方法剔除猪细胞表面引起排斥的异种抗原，让人体变得更容易接受。 第三节 生产用动物细胞的要求和获得 一、生产用动物细胞的要求 原代细胞 二倍体细胞系 转化细胞系 二、生产用动物细胞的获得 ⒈原代细胞 是直接取自动物组织器官,经过粉碎消化而获得的细胞悬（109/g）。 缺点：需要大量动物，费钱费劳力。 最常用的：鸡胚细胞、原代兔肾细胞、鼠肾细胞、淋巴细胞。 ⒉二倍体细胞系 　 原代细胞经过传代筛选克隆，从多种细胞成分的组织中，挑选并纯化出某种具有一定特征的细胞株。 二倍体细胞有正常细胞的特点： ①染色体组型是2n核型； ②贴壁依赖接触抑制； ③可传代培养50代，寿命有限； ④无致瘤性。 ⒊转化细胞系 通过某个转化过程形成的，常由于染色体断裂变成异倍体，失去正常细胞特点，而获得无限增殖能力。转化过程可以是自发的，和人工的，从肿瘤组织中。 4.融合细胞系 指两个或两个以上的细胞合并成一个细胞的特点，并获得了无限增殖的能力。 (1)仙台病毒融合法 (2)聚乙二醇融合法 (3)电融合法 5.重组工程细胞系 三、基因工程细胞的构建和筛选 1、真核细胞基因表达载体的构建 （1）.病毒：常用逆转录病毒、腺病毒 *优点：容易重组、载体容量大、病毒粒子形成与多角体蛋白无直接关系、具有强启动子、可作为标记物、某些病毒可进行体外表达。 （2）.质粒： 包含的基本成分： 可在原核生物体内进行扩增的质粒序列，使基因表达的调控元件、带有选择标记、有时带有选择性标记的扩增系统。 2、基因载体的导入和高效表达工程细胞株的筛选 a.