第三节 分离条件的选择.pptVIP

两个组分怎样才算达到完全分离？ 一是两组分的色谱峰之间的距离必须相差足够大，若两峰间仅有一定距离，而每一个峰却很宽，致使彼此重叠，则两组分仍无法完全分离； （由组分在两相的分配系数决定，与热力学性质有关） 二是峰必须窄。 （由组分在色谱柱中传质和扩散行为有关，与动力学性质有关） §2-3 色谱分离条件的选择 只有同时满足这两个条件时，两组分才能完全分离。 一、分离度 相邻两色谱峰保留值之差与两组分色谱峰底宽度平均值之比，用R表示。分离度可以用来作为衡量色谱峰分离效能的指标。 ★ R 越大，表明两组分分离效果越好 ★ 保留值之差取决于固定液的热力学性质 ★ 色谱峰宽窄反映色谱过程动力学因素 及柱效能高低 取决于两组分的热力学性质 取决于两组分的动力学因素 对于峰形对称且满足正态分布的色谱峰： R=1, 分离程度为98%； R=1.5，分离程度可达99.7%。 所以R=1.5时可认为色谱峰已完全分开。 二、色谱分离基本方程 对于难分离的混合物，在选择合适的实验条件时，合理认为Y1=Y2=Y,k1 ≈ k2=k 由 得： 代入 整理得 色谱分离基本方程 表明R随体系的热力学性质（α和k）的改变而变化，也与色谱柱的条件n有关。 同时可导出n和n有效的关系式： 则有效塔板数表示的色谱分离基本方程： 称为柱效项； 称为柱选择项； 容量因子项。 相对保留因子 分离度与柱效的关系（柱效因子 ） R ∝ n1/2 固定相一定 一定 理论塔板高度一定 R ∝ L1/2 限制：L过长，保留时间延长，分析时间延长，色谱峰扩展。 减小塔板高度 使用性能优良的色谱柱，并选择最佳分离条件 补充 分离度与容量比的关系（容量因子 ） k值增大，有利于分离， k 10时，对R的增加不明显， 反而会显著增加分析时间。 k的最佳范围：1 ~ 10，既可得到大的 R 值，亦可使分析时间不至于过长。 分离度与柱选择性的关系（选择因子 ） r2,1越大，柱选择性越好，分离效果越好。 r2,1 =1无法实现分离；增大r2,1的最有效方法是选择合适的固定液。 L = 16R2?H有效 a a-1 2 = n有效? H有效 《例一》 某色谱柱理论塔板数为1600，组分A、B的保留时间为90 s和100 s，两峰能够完全分离吗？（Rs1.5） 解： 由于两峰及其接近，保留时间只差10 s，即AB的n值可视作一致 注意： Rs＜1.5，即两峰不能完全分离。 《例二》 在某色谱柱上，组分AB的保留时间分别为90s和100s，要达到完全分离(Rs=1.5),理论塔板数最少应为多少？ 解： 在色谱进样量不超过最大允许进样量范围之内，可利用峰宽与保留值呈正比这个关系，即可得到 可见，A和B两组分的保留时间虽然差别小，但仍有差别。 《例三》 在一定条件下，两个组分的调整保留时间分别为85s和100s，要达到完全分离，即R=1.5，计算需要多少块有效塔板。若填充柱的塔板高度为0.1cm，柱长是多少？ 解： 即柱长为1.55米时，两组分可以得到完全分离。 《例四》 在一定条件下，如果n=3600，两组分的保留时间分别为12.2s和12.8s，计算分离度。要达到完全分离，及R=1.5，所需要的柱长? 解： 作业P61 21 三 分离操作条件的选择 1载气及流速的选择 对于一定的色谱柱和试样，有个最佳的载气流速，此时的柱效最高，根据 H=A+B/u+Cu， 用在不同流速下测得的塔板高度H对流速u作图，可得H-u曲线图，在曲线最低点，H最小，柱效最高，该点对应的流速为最佳流速u最佳 微分上式， 在实际分析中，为了缩短分析时间，往往是u稍大于u最佳 当流速较小时分子扩散(B项) 就成为色谱峰扩张的主要因素，此时应采用相对分子质量较大的载气(N2,Ar)，使组分在载气中有较小的扩散系数。 当流速较大时 传质项(C项)为控制因素，宜采用相对分子质量较小的载气(H2,He)，此时组分在载气中有较大的扩散系数，可减小气相传质阻力，提高柱效。 载气的选择还必须与检测器相适应。 2 柱温的选择 柱温直接影响分离效能和分析速度。 （1）应使柱温低于固定液的最高使用温度（超过该温度固定液易流失） （2） 柱温太低，分离度下降，色谱峰变宽变