肉苁蓉多糖脂质体制备及对鸡新城疫苗免疫效果影响的研究.pdfVIP

摘要 摘 要 ofCist锄chc 肉苁蓉多糖(Polysacc晡de 高分子活性物质，其可增强巨噬细胞吞噬功能、提高血清溶血素值，同时还具有单独或协同 ConA、PHA促进小鼠胸腺淋巴细胞增殖、脾脏淋巴细胞分泌IL．2的能力，显示出广泛的免疫 调节功能。但将CDPS作为一种免疫增强剂直接用于兽医临床，存在着体内代谢较快、作用 时间较短、使用成本较高等不足之处。脂质体作为一种人工合成的药物靶向载体，对所载药 物具有缓释、靶向沉积于网状内皮系统(RES)的特性，能延长药物的作用时间、提高生物利 用效率及药物定向作用于免疫系统的强度。本课题利用脂质体包封技术，将CDPS制备成一 种新型的免疫增强剂即肉苁蓉多糖脂质体，通过均匀试验设计原理，筛选出制备CDPS脂质 体的最佳工艺参数，并以目前仍严重危害养鸡业发展的病毒性传染病鸡新城疫(Newc雏tle Disease。ND)为研究对象，探讨CDPS脂质体对ND疫苗免疫效果的影响，并从细胞免疫、 疫机能的可能机制。主要研究内容及结果如下： 1．三种方法提取肉苁蓉多糖的比较研究 分别采用水提醇沉法、超声法、超声结合水提法提取肉苁蓉多糖，胰蛋白酶一Sevag法除 去蛋白，利用m01ish鉴别反应、碘一碘化钾反应、多糖水解反应鉴定提取物是否主要为多糖类 物质，葸酮一硫酸比色法测定提取物中多糖的含量。结果三种方法的提取物主要均为多糖，其 提取肉苁蓉多糖效果最好。 2．均匀试验设计法优化肉苁蓉多糖脂质体制备工艺研究 采用逆向蒸发法制备CDPS脂质体，透析处理后利用葸酮一硫酸比色法测定包封率，并以 其为CDPS脂质体质量的主要评价指标。根据均匀试验设计原理，按照U木e(64)均匀设计表设 计试验方案，探讨大豆卵磷脂与氯仿的比例、胆同醇与大豆卵磷脂的比例、肉苁蓉多糖与大 豆卵磷脂的比例、磷酸盐缓冲液PH值4个因素(每个因素6水平)对包封率的影响。结果， 仅为2．51％，且在此条件下制备的CDPS脂质体在4℃、避光保存120天内，PH值基本稳定， 虽有分层现象出现，但保存120天时包封率仍达50．15％。 3．肉苁蓉多糖脂质体对鸡ND苗免疫效果的影响研究 肌肉注射生理盐水(500ul／只)。分别于免疫前及免疫后第10、20、30天时，翅静脉采血收 I 两南大学硕十学何论文 集血清，测定其HI抗体效价及IgG含量，同时对免疫后30天时所收集血清进行鸡胚中和保 护试验。结果免疫后10天时，试验组及对照组HI抗体效价明显升高；免疫后20天时，I组 体效价均呈降低趋势，但I组显著高于II组和Ⅳ组(P0．05)，与空白脂质体组无显著差异 空白脂质体组(P0．01)，I组免疫后lO天至30天时，血清IgG水平呈逐渐升高趋势，其它 组免疫后10天至20天时，血清IgG水平呈升高趋势，但至30天时，血清IgG水平开始下降： 中和试验结果显示：CDPS脂质体组鸡胚死亡率明显低于cDPS、空白脂质体及生理盐水组， 中和指数以cDPS脂质体组最高。结果说明，CDPs脂质体对肉鸡免疫机能的促进作用最强。 4．肉苁蓉多糖脂质体对鸡免疫ND苗后血液中T淋巴细胞、IL、ⅡN活性的影响研究 在对肉鸡进行ND苗抗体检测的同时，于免疫后15天，每组随机取6羽，翅静脉无菌采 集抗凝血，采用酸性a一乙酸萘酯酶染色试验(ANAE)和淋巴细胞转化试验(MTT法)分别 测定T淋巴细胞ANAE阳性率及增殖活性。免疫后20天时，每组随机取8羽翅静脉采血分离 血清，采用ELISA方法测定血清中细胞因子IL．2、IL_4、I烈吖的含量。结果表明，淋巴细胞 脂质体组显著高于生理盐水组(P0．05)。以上结果说明：肉放蓉多糖脂质体对肉鸡免疫机 能的促进作用与血清中T淋巴细胞、IFN吖、IL_4、IL．2的活性变化相关。 关键词：鸡 肉苁蓉多糖脂质体免疫增强剂 白细胞介素 II Abstract Abstract cistanche al(ind