细胞实验论文.docVIP

外来化合物对细胞生理代谢的影响 —急性ZnCl2染毒对小麦幼苗茎叶组织SOD活力的影响 生命科学学院 2011级 生物科学 姓名：xxx 学号x 指导老师：张小民 李翠兰 摘要：本实验以小麦幼苗为实验对象，从Zn2+的毒性的氧化损伤出发，测定染不同浓度的ZnCl2（浓度分别为200mg/L、400mg/L、800mg/L、1600mg/L、0mg/L）后小麦幼苗茎叶组织SOD的活性变化，以此探讨Zn2+对小麦幼苗茎叶组织抗氧化酶SOD的影响，为研究细胞分子水平毒性机制提供科学依据。对本实验结果的简单分析表明，Zn2+浓度为400mg/L处理小麦幼苗后，SOD酶活力达到最大值，自此之后酶活力逐渐下降。充分展现了不同浓度的Zncl2对小麦幼苗SOD酶的活性影响的不同结果。 关键词：Zn2+ 小麦幼苗 SOD活力 工业污染、平常生活垃圾的不合理处置与金属矿山开采等,都会带来土壤重金属污染。土壤重金属容易被植物吸收,并在不同组织、器官中累积,对生物体产生毒性,影响植物体正常生长发育。锌 (Zinc,Zn) 作为植物正常生长发育必需的微量营养元素,是植物体内众多生理代谢过程相关酶的组成部分,并在稳定和保护生物膜免受氧化损伤、保证质膜完整性、稳定细胞膜透性等方面起着重要作用。然而,过高浓度的锌会对植物产生毒性,可能导致叶片萎黄、营养失衡和光合作用受抑制,从而延缓植物生长,甚至降低农产品产量[1]。 超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)在需氧原核生物和真核生物中广泛存在，是活性氧清除系统中第一个发挥作用的抗氧化酶。植物正常代谢过程和在各种环境胁迫下均能产生活性氧和自由基，活性氧和自由基的积累引起细胞结构和功能的破坏。SOD岐化超氧物阴离子自由基生成过氧化氢和分子氧，在保护细胞免受氧化损伤过程中具有十分重要的作用。[2] 1 实验材料与方法 1.1 实验材料 小麦幼苗 0.05mol/L PH7.0磷酸缓冲液（PBS） 超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒 四种不同浓度ZnCl2溶液（200mg/L、400mg/L、800mg/L、1600mg/L） 1.2 实验仪器 分析天平 研钵 冷冻离心机 紫外线可见分光光度计 恒温水浴锅 粗滤纸 吸水纸 离心管微样进样器 （50μL、100μL） 一次性塑料管 1.3 试验方法 1.3.1 Zncl2染毒处理 播种5～6h,萌发24～36h后将露白的种子随机摆放于培养皿中，30～40粒/皿左右，生长5天后，分别用不同浓度的Zncl2溶液处理4天。 1.3.2 粗酶提取液的制备 取茎叶0.2～0.3g,按1:10加入预冷的PBS液（1/2用于研磨，1/2用于清洗，小范围研磨，便于冲洗）冰浴研磨，并用剩余的PBS液冲洗入离心管，8000rpm离心15min,上清液即为5%的粗酶提取液，用于SOD酶活性的测定。 1.3.3 总SOD酶活测定 总SOD酶活测定按表1进行 表1 试剂 测定管（4个） 对照管（1个） SOD试剂1 1ml 1ml 2.5％粗酶提取液 50μL 蒸馏水 50μL SOD试剂2 100μL 100μL SOD试剂3 100μL 100μL SOD试剂4 100μL 100μL 充分摇匀，置于370C水浴40min 显色剂 2ml 2ml 混匀，室温放置10min,于波长550nm处，1cm光径比色环，蒸馏水调零，比色，测定各管OD值。 【说明】通过实验探索可知粗酶提取液量为40μL时最适宜。 【注】 2 实验结果与分析 2.1 不同浓度Zncl2溶液处理小麦茎叶总SOD酶活性（表2） 表2 Zncl2浓度（mg/L） 各重复的总SOD酶活力 总SOD平均值±标准差 1 2 3 4 0（对照） 1938 2250 2141 2216 2136.2500±139.79121 200 2110 2442 1906 1914 2093.0000±251.06440 400 3088 3094 2643 3228 3013.2500±255.15404 800 2109 3133 2631 2877 2687.5000±436.74363 1600 1966 2254 2619 2558 2349.2500±301.27216 2.2 SOD酶活性在不同浓度下的均值图如下 图1 2.3不同浓度Zncl2溶液处理组之间SOD酶活的t-检验P值（表3） 表3 P 0mg/L 200mg/L 400mg/L 800mg/L 200 1.000 — — — 400 0.007 * * 0.005* * — — 800 0.178 0.117 1.000 — 1